[发明专利]一种利用白酒糟制备纳豆芽孢杆菌培养物的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种利用白酒糟制备纳豆芽孢杆菌培养物的方法及其应用，属于发酵工程技术领域，包括：菌种活化、一级种子培养、白酒糟预处理、配制发酵培养基、固体发酵，得到纳豆芽孢杆菌培养物；本发明发酵过程采用固态发酵生产纳豆芽孢杆菌的方法，整个发酵过程遵循无菌操作规程，使纳豆芽孢杆菌的固态培养生产实现了纯种培养，可实现大规模放大生产。本发明涉及的发酵培养基解决了以白酒糟为主要原料发酵中存在的活菌数量低的问题，及液体培养中容易污染杂菌，营养利用率低，菌体及代谢物难分离的问题，大大提高了纳豆芽孢杆菌的产量。

技术领域

本发明涉及发酵工程技术领域，特别是涉及一种利用白酒糟制备纳豆芽孢杆菌培养物的方法及其应用。

背景技术

随着白酒工业的发展，白酒生产的副产品——白酒糟的利用已成为行业工作的重点。固态酒糟是白酒生产的主要副产物，也是白酒生产的主要污染物。由于一般采用高粱、小麦等原料，白酒糟的酸度高，含有丰富的蛋白质、氨基酸、维生素以及各种微量元素。实践已经证明，白酒糟综合利用程度直接影响企业的发展，如果处理不好，对环境的压力是巨大的；而白酒糟加工饲料的水平又关系到国家饲料政策的落实。

长期以来，白酒糟主要是直接用作农村饲料，对促进农村饲养业的发展及生物链的良性循环，发挥了重要的作用。但是，鲜白酒糟的营养结构已经不能满足饲养业科学喂养的要求及规模发展的需要，特别是鲜白酒糟含水量高达65％以上，贮存极其困难，管理不好极易霉变，大量的白酒糟任意堆放严重污染环境，困扰了企业的发展。

现有技术中已有一些专利等公开的文献，利用白酒酒糟通过发酵制备培养物，并应用到饲料中，但是发酵过程中，一般采用多种类的混合菌：比如酵母菌、霉菌、乳酸菌、枯草芽孢杆菌等中的多种混合发酵培养，由于多个菌种的培养条件不一致，需要采用不同的培养条件进行2-3期的培养才能获得最终的培养物，过程复杂和繁琐；另外，虽然采用了多种菌种混合进行发酵，但是最终的活菌含量并不高，经分析可能因为多种菌的适宜培养条件差异较大，可能在不同培养条件下，造成部分菌种不适应环境而死亡，因此最终的活菌数量并不高，进而导致在饲料中的应用价值有待考究；由于上述的原因，还可能导致酒糟的发酵不彻底，得到的发酵培养物的蛋白含量提高并不是很明显。因此，针对酒糟的特殊发酵条件，制备一种基于白酒糟的发酵培养物以高效的应用到动物饲料中很有必要。

目前，纳豆激酶芽孢杆菌作为一种新型微生态制剂，在家畜和水产养殖中的应用效果及作用机制引起了许多学者的广泛关注。而纳豆芽孢杆菌高密度液态发酵工业中，普遍使用蔗糖、酵母浸出物、胰蛋白胨，氯化钠等作为基础培养基，来进行纳豆菌的发酵，从生产角度来讲存在着单位培养基产生菌体数量的浓度较低、菌液分离的成本较高等缺点；同时，液态发酵结束后的菌体提纯一般要采用冷冻干燥或喷雾干燥的方法来保证高活菌数，但由于液态发酵所含的水分很多，所以需要复杂的预除水的环节，才能进行冷冻干燥或喷雾干燥工艺，这导致了成本极高。而固态发酵目前在纳豆芽孢杆菌发酵的研究与应用还不成熟，没有比较稳定的可以生产出优质纳豆芽孢杆菌产品的工艺的相关报道，且工业发酵方法中的固体发酵还有着生产环境要求严格，生产物料消毒困难繁琐，生产过程容易污染杂菌，营养利用率低，菌体及代谢物难分离等缺点。

而且，由于微生物发酵条件的复杂性，不同种类的微生物菌的发酵条件也存在着很大的不同，无法互相借鉴，因此，现亟需一种既可以利用白酒糟又可以得到纳豆芽孢杆菌活菌数高的专门针对纳豆芽孢杆菌的发酵方法以及条件。

发明内容

为解决上述现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种利用白酒糟制备纳豆芽孢杆菌培养物的方法及其应用。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种利用白酒糟制备纳豆芽孢杆菌培养物的方法，包括以下步骤：

(1)菌种活化：将-80℃保存的菌种在固体种子培养基平板上划线，在温度为37-40℃的条件下培养20-24h；所述菌种为纳豆芽孢杆菌；