[发明专利]一种问号钩端螺旋体MAP疫苗的制备方法在审
| 申请号： | 201910785931.X | 申请日： | 2019-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN110478478A | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 孙爱华;严杰;张金良;楼宏强 | 申请（专利权）人： | 杭州医学院 |
| 主分类号： | A61K39/02 | 分类号： | A61K39/02;A61P31/04;C07K19/00;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 33213 杭州浙科专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 刘元慧<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 310053 浙江省杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备 有效诱导细胞 原核表达系统 螺旋体 高分子核心 毒副作用 多价抗原 多抗原肽 抗原表位 免疫效果 融合基因 问号钩 表位 构建 蛋白 疫苗 细胞 联合 | ||
【权利要求书】：
1.一种问号钩端螺旋体MAP疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）选择钩体4种蛋白的6个表位设计T-B联合多价抗原表位融合基因，经合成后插入pET-28a表达载体构建以
2）采用中空纤维超滤器收集Ni-NTA亲和层析法提纯后的T-B联合多价抗原表位rLLGL蛋白，碳二亚胺活泼酯法封闭T-B联合多价抗原表位氨基，然后通过其羧基与Poly-Asp-Lys交联，采用中空纤维超滤器收集T-B表位-Poly-Asp-Lys交联物；
3）将步骤2）收集的T-B表位-Poly-Asp-Lys交联物与氢氧化铝佐剂混合后形成多抗原肽MAP疫苗。
2.如权利要求1所述的一种问号钩端螺旋体MAP疫苗的制备方法，其特征在于步骤1）中4种单位的6个表位分别为LipL21蛋白的97-122和176-184位氨基酸构成的表位、LipL32蛋白的133-160和221-247位氨基酸构成的表位、GroEL蛋白的215-247位氨基酸构成的表位、Loa22蛋白的22-90位氨基酸构成的表位。
3. 如权利要求1所述的一种问号钩端螺旋体MAP疫苗的制备方法，其特征在于步骤2）中LLGL多价表位基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1 所示。
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