[发明专利]Jo-1蛋白的制备方法及其应用

说明书

本发明提供了一种Jo‑1蛋白的制备方法及其应用，涉及蛋白质工程技术领域。该Jo‑1蛋白的制备方法包括采用pET‑28a表达带有MBP标签的Jo‑1融合蛋白，然后在纯化蛋白的过程中切除所述标签，得到所述Jo‑1蛋白。该制备方法生产效率高，制备得到的Jo‑1蛋白接近天然蛋白，因此可以作为Jo‑1抗原，以用于制备Jo‑1抗体，或者用于制备诊断Jo‑1相关疾病的产品。

技术领域

本发明涉及蛋白质工程技术领域，尤其是涉及一种Jo-1蛋白的制备方法及其应用。

背景技术

氨酞-tRNA合成酶是胞内酶，由“管家”基因编码，在所有组织中表达，氨酞-tRNA合成酶主要催化包括蛋白质合成过程中的氨基酸活化和氨酞-tRNA复合物的形成。

人类的组氨酞-tRNA合成酶(CHSHRS)还是一类结缔组织病(自身免疫疾病)中的多发性肌炎(polymyositis)和皮肌炎(dermatomyositis)(简称PM/DM)的标志性自身抗体的抗原，临床上将引起PM/DM疾病的作为抗原的组氨酞-tRNA合成酶称为Jo-1。在PM/DM疾病中，Jo-1抗体的阳性率最高，约为18～20％，抗Jo-1抗体多见于10～40％多发性肌炎、2～10％皮肌炎和3～8％重叠综合征患者。因此，为了研究氨酞-tRNA合成酶以及和Jo-1抗原和抗体的相关疾病，一种高效制备Jo-1蛋白的方法是目前需要的。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种Jo-1蛋白的制备方法，该制备方法生产效率高，制备得到的Jo-1蛋白接近天然蛋白。

本发明的第二目的在于提供上述Jo-1蛋白的制备方法的应用。

为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种Jo-1蛋白的制备方法，包括：采用pET-28a表达带有MBP标签的Jo-1融合蛋白，然后在纯化蛋白的过程中切除所述MBP标签，得到所述Jo-1蛋白。

优选地，所述Jo-1蛋白含有如SEQ ID NO.1所示序列。

优选地，所述带有MBP标签的Jo-1融合蛋白中，MBP标签和Jo-1之间含有蛋白酶的酶切位点；

优选地，所述蛋白酶包括Xa因子、凝血酶、肠激酶、凝乳酶、胶原酶或TEV酶；

优选地，所述蛋白酶包括TEV酶。

优选地，将含有蛋白酶的酶切位点的MBP标签序列整合至pET-28a的NcoⅠ和BamHⅠ之间；将Jo-1蛋白序列整合至pET-28a的BamHⅠ和HindⅢ之间，得到表达所述带有MBP标签的Jo-1融合蛋白的pET-28a载体。

优选地，所述纯化蛋白包括先对表达Jo-1融合蛋白的菌体进行亲和层析，然后切除Jo-1融合蛋白中的MBP标签。

优选地，所述纯化蛋白还包括在切除Jo-1融合蛋白中的MBP标签后进行离子交换层析。

优选地，所述制备方法包括如下步骤：

(a)使用含有BamHⅠ序列的上游引物和含有HindⅢ序列的下游引物扩增Jo-1基因，其中Jo-1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

(b)在pET-28a的NcoⅠ和BamHⅠ间插入MBP序列，其中MBP序列含有编码TEV酶的酶切位点的序列；

(c)将步骤(a)的扩增产物整合至步骤(b)得到的pET-28a；

(d)将(c)获得的pET-28a转化至E.coli DH5α中培养，筛选出阳性克隆并经测序验证后扩大培养，获取阳性克隆pET-28a；