[发明专利]杜氏盐藻二酰甘油酰基转移酶基因DsDGAT及应用

说明书

本发明属于分子克隆技术领域，具体涉及杜氏盐藻二酰甘油酰基转移酶基因DsDGAT及应用。本发明的目的在于获取一种杜氏盐藻二酰甘油酰基转移酶基因DsDGAT，根据该基因核苷酸序列弥补了盐藻DGAT基因研究的空白，丰富了植物界DGAT基因的生物信息数据；在于揭示DsDGAT基因编码蛋白的氨基酸序列及其特征；在于获取DsDGAT基因核苷酸序列在指示盐藻二酰甘油酰基转移酶活性及富油水平方面的应用作用。本发明的基因DsDGAT核苷酸序列丰富了低等藻类植物的DGAT基因信息数据，相关研究人员可根据该信息及已设计的特异性引物对，对其部分(全部)区域进行特异性扩增。

技术领域

本发明属于分子克隆技术领域，具体涉及杜氏盐藻二酰甘油酰基转移酶基因DsDGAT及应用。

背景技术

杜氏盐藻(Dunaliella salina)简称盐藻，是一种生活在极端环境下的真核单细胞噬盐微藻，属绿藻门、绿藻纲、团藻目、盐藻科、杜氏藻属，多分布于海水及高盐度的盐湖，具有强大的渗透平衡能力。杜氏盐藻富含油脂、β-胡萝卜素、多糖等生物活性物质，以特色杜氏藻株作为生物反应器，对其生物活性物质进行规模化生产，具有重要的商业与工业应用前景。此外，我国目前正面临着土地盐渍化的危机，这严重影响了农业生产及生态绿化，利用分子改良后的耐盐植物对盐碱地进行生物修复是解决上述危机的一个重要手段。作为耐盐性最高的真核微藻，杜氏盐藻将是工业生产盐藻活性物质，挖掘关键耐盐基因，进而深入研究植物耐盐机理的理想物种，对该特色藻类植物进行分子及代谢水平的相关研究很有必要。

二酰甘油酰基转移酶(diacylglycerol cyltransferase,DGAT)对油脂合成代谢起到正调控作用，被证实是催化三酰甘油生物合成的最后一步关键限速酶，在生物界中广泛存在。DGAT基因已在多种植物中成功克隆，然而截止目前，藻类植物中仅见于微拟球藻(Nannochloropsis oceanica)、莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardti)、团藻(Volvoxcarterif.nagariensis)、三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)及小球藻(Chlorellavariabilis)。研究显示，当杜氏盐藻从低盐环境转到高盐环境时，其光合作用反而增强，CO₂同化作用也增强，加速了甘油三脂的大量生成，通过甘油三脂的渗透调节及其它机制的协同作用，使其最终能够耐受高盐胁迫。二酰甘油酰基转移酶基因的表达直接影响到该限速酶的活性，而该酶催化活性的高低一定程度上将影响到盐藻甘油三酯乃至整个油脂的代谢水平。然而截止目前，作为典型的耐盐模式藻株，国内外仍未有公开或发表过杜氏盐藻DGAT基因核苷酸序列及其应用。

发明内容

本发明的目的在于获取一种杜氏盐藻二酰甘油酰基转移酶基因DsDGAT，根据该基因核苷酸序列弥补了盐藻DGAT基因研究的空白，丰富了植物界DGAT基因的生物信息数据；在于揭示DsDGAT基因编码蛋白的氨基酸序列及其特征；在于获取DsDGAT基因核苷酸序列在指示盐藻二酰甘油酰基转移酶活性及富油水平方面的应用作用。提供杜氏盐藻二酰甘油酰基转移酶基因DsDGAT及应用，为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

本发明杜氏盐藻二酰甘油酰基转移酶基因DsDGAT，所述基因DsDGAT的cDNA全长序列如SEQ ID NO.1所示，由2915个碱基组成。

本发明所述SEQ ID NO.1序列编码区1644bp，SEQ ID NO.1序列5’端非编码区515bp，SEQ ID NO.1序列3’端非编码区756bp。

本发明杜氏盐藻二酰甘油酰基转移酶基因DsDGAT编码的蛋白质，该基因编码的蛋白质由547个氨基酸残基组成，分子量为62.55kDa，等电点为9.51，整体为亲水蛋白质，该基因编码的蛋白质序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明杜氏盐藻二酰甘油酰基转移酶基因DsDGAT的克隆方法，所述方法包括以下步骤：