[发明专利]一种NK与γδT细胞的同时培养方法有效
| 申请号： | 201910791742.3 | 申请日： | 2019-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN110438077B | 公开（公告）日： | 2021-02-26 |
| 发明（设计）人： | 魏彩华;熊林娇 | 申请（专利权）人： | 北京致仁生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京志霖恒远知识产权代理事务所(普通合伙) 11435 | 代理人： | 郭栋梁 |
| 地址： | 100193 北京市海淀*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 nk 细胞 同时 培养 方法 | ||
1.一种NK与γδT细胞的同时培养方法，其特征在于，步骤如下：
S1、制作通用型aAPC；
S2、耗竭PBMC中的单核细胞；
S3、NK与γδT细胞的混合培养；
NK/γδT细胞培养：
(1)在获得的无单核细胞的PBMC中加入aAPC，比例为1∶1；
(2)在AlyS203、10％自体血清、1000ng/mlIL-2的培养基中，37℃，5％CO2，培养；
(3)每隔3天补液，14天后收获细胞。
2.根据权利要求1所述的一种NK与γδT细胞的同时培养方法，其特征在于，制作通用型aAPC步骤如下：
(1)取实验室构建好的诱导多能干细胞(ips)；
(2)将ips按1∶10的比例接种到脐带间充质干细胞中，添加DC诱导培养基培养，每隔3天换液一次；
(3)连续培养至第14天，去除未贴壁的细胞，用PBS洗3遍；
(4)添加RPMI-1640、200ng/ml唑来膦酸、10％FBS培养液，再培养一周后当所有细胞自动悬浮后，收获aAPC。
3.根据权利要求2所述的一种NK与γδT细胞的同时培养方法，其特征在于：DC诱导培养基为RPMI-1640、10ng/mlGM-CSF、20ng/mlIL-4、5ng/mlIGF-1、1ug/mlSCF、5ug/mlY27632和10％FBS。
4.根据权利要求1所述的一种NK与γδT细胞的同时培养方法，其特征在于，耗竭PBMC中的单核细胞：
(1)取患者外周血50-100ml，用淋巴细胞分离液分离PBMC；
(2)将PBMC按1*107的细胞量接种到培养瓶中，RPMI-1640，37℃，5％CO2，培养过夜；
(3)吸取为贴壁的细胞，用PBS洗3遍。
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