[发明专利]用于检测儿童中枢性性早熟的检测引物、试剂盒及应用

说明书

本发明涉及儿童中枢性性早熟检测技术领域，特别是涉及用于检测儿童中枢性性早熟的检测引物，所述检测引物包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1～6所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7～12所示。基因检测试剂包括上述检测引物。基因检测试剂盒包括上述检测引物。本发明解决现有技术中检测儿童中枢性性早熟存在常规检测涉及的基因位点少以及高通量测序技术在临床上存在限制的问题。通过合理而巧妙的引物序列设计实现同时检测多个变异位点，实现了42个变异位点的便捷检测，检测周期短、成本低，便于在临床实际推广和应用。

技术领域

本发明涉及儿童中枢性性早熟检测技术领域，特别是涉及用于检测儿童中枢性性早熟的检测引物、试剂盒及应用。

背景技术

青春期是儿童生长发育到成年的过渡时期，以性发育成熟为主要标志。性腺发育过程受中枢神经系统与内分泌系统的双重调节。下丘脑合成促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasinghormone，GnRH)，以脉冲式分泌作用于垂体，刺激垂体前叶释放黄体生成素(Luteinizinghormone，LH)和卵泡刺激素(Follicle-stimulatinghormone，FSH)，进而激活性腺功能，分泌睾酮(Testosterone，T)和雌激素(Estrogen，E)，促进生殖器官成熟，启动青春期发育，开始出现第二性征。

随着社会的发展、生活方式的转变、生活环境和饮食结构的改变，儿童性早熟的发生率呈现逐年上升趋势，超过10％的女童8岁前出现乳房发育，1.65％的女童在10岁前发生月经来潮。

性早熟依据病因可分为：中枢性性早熟和外周性性早熟。外周性性早熟(PPP)，是指内源性或外源性的性激素分泌增加，导致生殖器官提早发育、第二性征提早出现。中枢性性早熟(central precocious puberty，CPP)是由于下丘脑-垂体-性腺轴的提前启动所致，女孩的发病率约为男孩的20倍。

性早熟不仅会造成身材矮小，影响儿童的正常发育和心理健康，还会导致成年后乳腺癌、子宫内膜癌、肥胖、糖尿病和心血管疾病等的发生风险显著增高。另外，性早熟还会增加青少年时期行为障碍的发生风险。因此，儿童性早熟的早期诊断和及时干预，不仅可以使青春发育回归正常的生理过程，还可以减少后期相关疾病发生的风险。

在不同的个体之间，青春期启动的时间存在很大差异，主要与遗传、环境、营养、种族、社会经济等因素的相互作用有关，其中遗传因素起关键作用，约占50-80％。到目前为止，被证实与CPP发生相关的突变基因有四个：KISS1基因、KISS1R基因、DLK1基因、MKRN3基因。

(1)KISS1和KISS1R基因：KISS1基因位于常染色体1q32上，包含4个外显子及3个内含子，编码kisspeptin蛋白；KISS1R基因，即G蛋白耦联受体54基因(GPR54)，位于常染色体的19p13.3上，由5个外显子和4个内含子组成，是kisspeptin的特异性受体。kisspeptin参与调控青春期的激活过程，kisspeptin与GnRH神经元上的GPR54受体结合，促进GnRH的脉冲释放，从而启动青春期。

(2)MKRN3基因：位于常染色体15q11.2上，不含内含子，为父源性表达的印记基因(在母源性的等位基因上因甲基化而沉默，而在父源性的等位基因上被表达)，MKRN3水平与促性腺激素、雌二醇呈负相关，在青春期启动前下降，在儿童期可调节下丘脑GnRH的分泌。

(3)DLK1基因：位于常染色体14q32.2上，含有5个外显子，为父源性表达的印记基因，编码由383个氨基酸组成的Delta-Like1蛋白。在胚胎期，DLK1广泛表达，参与骨骼肌的生长发育；出生后，DLK1表达下降，在调节青春期启动中发挥重要作用。