[发明专利]一种具有绿色荧光活性的检测蛋白的检测试剂盒有效
申请号: | 201910792893.0 | 申请日: | 2019-08-26 |
公开(公告)号: | CN110511283B | 公开(公告)日: | 2022-05-17 |
发明(设计)人: | 朱传刚;沈元曦;纪荣毅;林矫矫;洪炀;岳永程 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心) |
主分类号: | C07K19/00 | 分类号: | C07K19/00;C12N15/62;G01N33/68;G01N33/58;G01N33/533;G01N33/558 |
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地址: | 200241 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 具有 绿色 荧光 活性 检测 蛋白 试剂盒 | ||
本发明提供一种具有绿色荧光活性的检测蛋白的日本血吸虫抗体检测试剂盒,所述日本血吸虫抗体检测试剂盒中包括一种日本血吸虫抗体检测试剂条和融合蛋白;所述融合蛋白包括链球菌蛋白G(SPG)片段和荧光蛋白。本发明的日本血吸虫抗体检测荧光试纸条中,日本血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)和链球菌蛋白G(SPG)蛋白分别作为检测线(T),质控线(C)的包被抗原。试纸条选用硝酸纤维素膜(CN95)作为层析材料,玻璃纤维素膜作为样品垫,与PVC底板和吸水纸等一同组装成试纸条。
技术领域
本发明涉及免疫检测领域,特别涉及一种具有绿色荧光活性的检测蛋白的检测试剂盒。
背景技术
日本血吸虫是人畜共患的寄生性扁形异体吸虫,日本血吸虫具有复杂的生活史,广泛分布的中间宿主以及多种传播或保虫宿主,严重危害全球人畜健康并影响着各国畜牧业发展,是我国长期重点防治的五大寄生虫病之一。日本血吸虫的病变机理尚未完全了解,但 已有研究发现虫卵沉积、虫体刺激、毛蚴腺体分泌的蛋白抗原等致病因素都可以引发寄生部位的各种病灶(Garcia EG,Mitchell GF,Rivera PT,Evardome RR,Almonte RE,TiuWU. Evidence of anti-embryonation immunity and egg destruction inmicesensitized with immature eggs of Schistosoma japonicum.Asian PacificJournalof AllergyImmunology,1987,5:137)。
链球菌蛋白G(SPG)是能与人及多种动物的抗体IgG结合的一种链球菌细胞壁蛋白,最早由Kronvall在1973年报道。A、C、G群链球菌的细胞壁及培养上清液中均含有该蛋白,SPG与葡萄球菌蛋白A(SPA)的特性明显不同。在1984年,Bjorck等人将这种蛋白统称为链球菌蛋白G,并对其进行了分离和纯化。目前,虽然SPA由于具有与抗体Fc端结合的特性,较为广泛的应用于免疫学实验中。然而,SPG与SPA相比,SPG与IgG的结合力更强,结合谱也更广(曹之舫,1989)。
GFP是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质,从蓝光到紫外线都能使其激发,发出绿色萤光。由于荧光蛋白能稳定在后代遗传,并且能根据启动子特异性地表达,常被用作报告基因。在需要定量或其他实验中慢慢取代了传统的化学染料。增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)是GFP突变系,可以发射出的荧光强度比GFP大6倍以上,因此,比GFP更适合作为 一种报告基因来研究基因表达、 调控、 细胞分化及蛋白质在生物体内定位和转运等。
目前血吸虫病诊断的抗原主要为天然的虫源性抗原。已建立间接血凝、ELISA、胶体金试纸条等检测方法。随着血吸虫感染率和感染程度的下降,这些方法的灵敏性还有待提高,须继续寻找高敏感性和可定量的诊断方法。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种快速、高灵敏的免疫检测产品及方法,实现高效、高密度的免疫检测。
为了实现本发明的目的,本发明采用如下技术方案:
一种具有绿色荧光活性的检测蛋白,包括链球菌蛋白G(SPG)片段和荧光蛋白,所述链球菌蛋白G(SPG)片段为含有SPG的C3区段的序列,优选为C3、C3-D-C3、C3-D-C3-D-C3中的一种,所述荧光蛋白为绿色荧光蛋白;
优选的,一种具有绿色荧光活性的检测蛋白,所述检测蛋白的核苷酸序列为SEQID NO.5、7、9之一所示;所述检测蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.6、8、10之一所示。
本发明同时提供一种用于免疫分析的产品,所述产品包括本发明所述的融合蛋白。
优选的,本发明提供一种日本血吸虫抗体检测试剂盒,所述日本血吸虫抗体检测试剂盒中包括一种重组的G蛋白与绿色荧光蛋白的融合蛋白和一种日本血吸虫抗体检测荧光试纸条。
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