[发明专利]一种PCR检测前痰液标本的改良处理方法

说明书

本发明涉及一种PCR检测前痰液标本的改良处理方法，包括：痰液标本中去掉用于涂片镜检所需痰液后，余下的痰液加入含有NaOH和NALC的前处理液形成既用于实时荧光PCR检测且又用于痰结核分枝杆菌培养的混合液。本发明通过改良痰处理方法，无需患者另外提供一份痰标本，利用痰培养所用的前处理液处理后的痰标本进行实时荧光PCR检测，患者只需提供满足常规痰涂片和痰培养的量，就可以同时做结核分枝杆菌DNA检测，且检测结果依然准确、精密，克服了现有技术中仅严格按照PCR检测才能定量准确的技术偏见，简单易操作，减轻了患者的负担，提高了诊断效率，因其临床评价优良，为基层实验室提供了参考依据。

技术领域

本发明涉及检测分析技术领域，具体涉及一种PCR检测前痰液标本的改良处理方法。

背景技术

结核病(tuberculosis，TB)是全球面临的主要公共卫生挑战之一，结核病的防治已从“遏制结核病”向“终止结核病”的目标迈进。快速、有效诊断结核病对于控制结核病的防控意义重大。随着核酸扩增技术的发展，实时荧光PCR(Polymerase Chain Reaction，全文中简称PCR)广泛应用于临床痰标本结核分枝杆菌的检测，与显微镜检相比，显著提高了病原学阳性检出率；与结核分枝杆菌培养相比，显著缩短了检出时间。针对临床工作中遇到疑似肺结核病患者少痰、难以咳出痰的情况，有些患者只能提供少量的痰液用于常规的涂片镜检、痰培养之后没有足够的痰液用于核酸检测，通知患者补送标本又会耽误时间，而且要求少痰、难以咳出痰液的患者再提供一份痰液也是非常困难的事情。

发明内容

本发明的目的是提供一种PCR检测前痰液标本的改良处理方法，解决现有技术中患者痰液量少而影响实时荧光PCR检测的问题。

本发明解决技术问题所采用的技术方案是：一种PCR检测前痰液标本的改良处理方法，包括：痰液标本中去掉用于涂片镜检所需痰液后，余下的痰液加入含有NaOH和NALC的前处理液形成既用于实时荧光PCR检测且又用于痰结核分枝杆菌培养的混合液。

在本发明的改良处理方法中，含有NaOH和NALC的前处理液中NaOH的浓度是1％-3％，NALC的浓度是0.1％-1.0％。

在本发明的改良处理方法中，含有NaOH和NALC的前处理液中NaOH的浓度是1.5％-2.5％，NALC的浓度是0.3％-0.8％。

在本发明的改良处理方法中，含有NaOH和NALC的前处理液中NaOH的浓度是2％，NALC的浓度是0.5％。

在本发明的改良处理方法中，所述前处理液中还含有柠檬酸钠。

在本发明的改良处理方法中，所述柠檬酸钠的浓度1.2％-1.8％。

在本发明的改良处理方法中，余下的痰液中加入含有NaOH和NALC的前处理液的体积是余下的痰液的体积的1-2倍。

在本发明的改良处理方法中，所述改良处理方法还包括：在余下的痰液加入含有NaOH和NALC的前处理液后，进行涡旋振荡，离心，并弃上清液。

在本发明的改良处理方法中，所述改良处理方法还进一步包括：进一步加入1mL无菌生理盐水涡悬；再次离心，弃上清液。

在本发明的改良处理方法中，所述改良处理方法还进一步包括：加入核酸释放剂，金属浴加热，然后离心，取上清液作为待测样本。

实施本发明的PCR检测前痰液标本的改良处理方法，具有以下有益效果：本发明通过改良痰处理方法，无需患者另外提供一份痰标本，利用痰培养所用的前处理液处理后的痰标本进行实时荧光PCR检测，患者只需提供满足常规痰涂片和痰培养的量，就可以同时做结核分枝杆菌DNA检测，且检测结果依然准确、精密，克服了现有技术中仅严格按照PCR检测才能定量准确的技术偏见，简单易操作，减轻了患者的负担，提高了诊断效率，因其临床评价优良，为基层实验室提供了参考依据。