[发明专利]一种藤茶中二氢杨梅素对胃蛋白酶抑制作用的评价方法

说明书

本发明公开了一种藤茶中二氢杨梅素对胃蛋白酶抑制作用的评价方法，包括以下步骤：（1）胃蛋白酶作用时间的优化；（2）胃环境模拟成分NaCl、盐酸及终止剂三氯乙酸的影响；（3）盐酸对胃蛋白酶、血红蛋白的影响；（4）胃蛋白酶浓度的优化；（5）体外胃模拟模型建立的影响因素确定；（6）DMY和MYR对体外胃蛋白酶反应体系的影响；（7）DMY和MYR对胃蛋白酶活力的评价。

技术领域

本发明涉及体外胃蛋白酶模型建立及活性评价领域，具体是一种藤茶中二氢杨梅素对胃蛋白酶抑制作用的评价方法。

背景技术

胃蛋白酶是人体与动物胃中唯一的一种蛋白质水解酶，是机体中重要的消化酶之一；蛋白质由食道进入胃后，首先经胃蛋白酶水解成多肽，部分多肽再被蛋白酶分解为酪氨酸、苯丙氨酸等氨基酸，最后被人体吸收。但是部分药物进入胃后，会改变胃蛋白酶的活性环境，最终对胃蛋白酶的活性以及药物在体内的分布与代谢产生重要影响；藤茶作为药食两用的植物， 具有清热、消炎、降血糖、降血脂等功效。二氢杨梅素(Dihydromyricetin，DMY)、 杨梅素(Myricetin，MYR)占藤茶中总黄酮含量的30%左右，大量研究表明：二氢杨梅素或杨梅素成分，在消炎、镇痛、抗高血压、保肝护肝及解酒、增强免疫力、抗氧化和抑菌等方面，均表现出较好生物活性作用，是具有潜在开发价值的一类天然药物；本发明通过建立体外胃模拟模型来考察DMY、MYR对胃蛋白酶活力的影响及量效关系，测定了DMY、MYR对胃蛋白酶活力的抑制作用，可为后期天然黄酮醇类化合物的开发应用提供了重要的参考价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种藤茶中二氢杨梅素对胃蛋白酶抑制作用的评价方法，本发明具有操作简单，能耗低，提取率高等优点。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种藤茶中二氢杨梅素对胃蛋白酶抑制作用的评价方法，包括以下步骤：

（1）胃蛋白酶作用时间的优化：向胃模拟反应容器A、B、C中加入5mL1%血红蛋白溶液于37℃保温10min后，加入0.02mg/mL胃蛋白酶溶液1mL，A、B、C搅拌反应时间分别为10min、30min、60min，最后加入5%三氯乙酸5mL搅匀，离心取清液，使用紫外可见分光光度计在190nm~1100nm进行全波长扫描，确定胃蛋白酶作用的最佳时间；

（2）胃环境模拟成分NaCl、盐酸及终止剂三氯乙酸的影响分析：取0.1mol/L氯化钠溶液、0.065mol/L稀盐酸溶液、5%的三氯乙酸各10mL于胃模拟反应容器中，在温度37℃保温10min，使用紫外可见分光光度计在190nm~1100nm进行全波长扫描，观察其影响情况；

（3）盐酸对胃蛋白酶、血红蛋白的影响分析：取0.02mg/mL的胃蛋白酶溶液10mL于胃模拟反应容器中，在37℃保温10min，使用紫外可见分光光度计在190nm~1100nm进行全波长扫描，观察其影响情况；

（4）胃蛋白酶浓度的优化：向胃模拟反应容器中加入1%的血红蛋白溶液5mL于37℃保温10min，分别加入0.02、0.06、0.10、0.14、0.18、0.22mg/mL胃蛋白酶溶液1mL，搅拌反应10min，最后加入5%三氯乙酸5mL搅匀，离心取清液，使用紫外-可见分光光度计在275nm处测定吸光度值，确定胃蛋白酶的最佳浓度；

（5）体外胃模拟模型建立的影响因素确定：综合（1）-（4）的各项因素影响，确定建立体外胃蛋白模型；

（6）DMY和MYR对体外胃蛋白酶反应体系的影响分析：配制0.025mg/mL的二氢杨梅素和同浓度的杨梅素溶液于胃模拟反应容器中，在37℃保温10min，使用紫外可见分光光度计在190nm~1100nm进行全波长扫描，观察影响情况。