[发明专利]一种饲用复合微生态产品中凝结芽孢杆菌芽孢的计数方法

权利要求书

1.一种饲用复合微生态产品中凝结芽孢杆菌芽孢的计数方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)样品处理

取饲用复合微生态产品至无菌生理盐水中制成初始菌悬液，将初始菌悬液用无菌生理盐水依次进行10倍梯度稀释；

2)高温处理

分别取三个稀释度的菌液于80℃水浴处理10min，冷却至室温待用；

3)培养

取步骤2)中的菌液涂布于pH=5.0～5.5的MRS改良培养基平皿上，倒置于50℃培养箱内培养24～48h后对凝结芽孢杆菌芽孢计数；

所述MRS改良培养基包括按质量百分比计的如下组分：酵母浸粉0.5%、胰蛋白胨1%、牛肉膏粉1%、葡萄糖2%、柠檬酸铵0.2%、乙酸钠0.3%、磷酸氢二钾0.2%、硫酸镁0.01%、硫酸锰0.005%、吐温80 0.1%、琼脂粉2%，余量为水。

2.如权利要求1所述的饲用复合微生态产品中凝结芽孢杆菌芽孢的计数方法，其特征在于，所述无菌生理盐水为8.5g氯化钠溶于1000ml水中，并于121℃灭菌30min得到。

3.如权利要求1所述的饲用复合微生态产品中凝结芽孢杆菌芽孢的计数方法，其特征在于，所述步骤1)中饲用复合微生态产品的质量与无菌生理盐水的体积之比为1:9。

4.如权利要求1所述的饲用复合微生态产品中凝结芽孢杆菌芽孢的计数方法，其特征在于，所述MRS改良培养基于115℃灭菌30min。

5.如权利要求1所述的饲用复合微生态产品中凝结芽孢杆菌芽孢的计数方法，其特征在于，所述步骤3)中，选取肉眼观察到的平均菌落数在30～300个范围内的MRS改良培养基平皿，且同一梯度平行测定值相对误差不超过10%，作为菌落总数测定的范围对凝结芽孢杆菌芽孢计数。

6.如权利要求5所述的饲用复合微生态产品中凝结芽孢杆菌芽孢的计数方法，其特征在于，所述步骤3)中，对凝结芽孢杆菌芽孢计数方式如下：

当只有一个稀释度的平均菌落数在30～300个范围时，则凝结芽孢杆菌芽孢计数以该稀释度的MRS改良培养基平皿菌落数乘其稀释倍数；

当有两个稀释度的平均菌落数均在30～300个范围时，则求出两者菌落总数之比值，若其比值小于或等于2，则凝结芽孢杆菌芽孢计数为两者菌落平均数，若其比值大于2，则凝结芽孢杆菌芽孢计数为其中较小的菌落数。

7.如权利要求1所述的饲用复合微生态产品中凝结芽孢杆菌芽孢的计数方法，其特征在于，所述步骤3)中，MRS改良培养基平皿上平均菌落数不在30～300个范围内，对凝结芽孢杆菌芽孢计数方式如下：

当所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则凝结芽孢杆菌芽孢计数为稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数；

当所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则凝结芽孢杆菌芽孢计数为稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数；

当所有稀释度的平均菌落数均不在30～300个之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则凝结芽孢杆菌芽孢计数为接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数；

当所有稀释度均无菌生长，则凝结芽孢杆菌芽孢计数为每克或每毫升小于10个。