[发明专利]一种区分牙龈干细胞和乳牙牙髓干细胞的标志物及其应用

权利要求书

1.ANXA2在区分牙龈干细胞和乳牙牙髓干细胞中的应用。

2.检测ANXA2表达水平的试剂在制备区分牙龈干细胞和乳牙牙髓干细胞的试剂盒中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，所述试剂为针对ANXA2 mRNA的引物或者针对ANXA2蛋白的抗体，其中引物序列如SEQ ID NOs：1－2所示。

4.一种快速区分牙龈干细胞与乳牙牙髓干细胞的方法，所述方法包括对待区分的细胞样品进行ANXA2 mRNA表达水平或者ANXA2蛋白表达水平的检测，表达水平显著高的为牙龈干细胞，表达水平显著低的为乳牙牙髓干细胞。

5.如权利要求4所述的方法，其具体包括如下步骤：

(1)细胞总RNA提取后反转录获得cDNA；

(2)荧光定量PCR扩增：使用针对ANXA2的引物检测ANXA2 mRNA的表达水平，采用的内参为GAPDH基因，针对ANXA2的引物为SEQ ID NO：1－2，针对GAPDH的引物为SEQ ID NO：3－4；

(3)结果判断：表达水平显著较高的为牙龈干细胞，显著较低的为乳牙牙髓干细胞。

6.如权利要求5所述的方法，其中步骤(1)具体为：

倒去细胞培养基，PBS洗2-3次，加入Trizol溶液用枪吹散贴附在培养皿上的细胞，直接转移到1.5mL离心管中，加入Trizol冲洗培养皿收获剩下未完全吹散下来的细胞，转移到同一离心管中震荡后，室温静置，加入氯仿，震荡混匀后室温静置，离心，吸取上层水相，加入异丙醇混匀，室温静置，离心，弃上清，加入无水乙醇，漂洗2次，吹干，加入DEPC处理水混匀，测OD值定量RNA浓度和纯度，吸取前述RNA，用RT-PCR试剂盒进行cDNA获取，37℃反应后高温终止反应。

7.如权利要求5或6所述的方法，其中步骤(2)包括如下步骤：

在200μl PCR管配制反应体系：引物混合液1μL，Master Mix混合物18μL，模板cDNA 1μl，加盖密封，置于荧光定量PCR仪中，第一步预变性95℃反应10min；第二步变性95℃反应10s；第三步退火60℃反应30s；第四步延伸72℃反32s；第二步到第四步循环40次；进入溶解程序，依次进行95℃反应15s；60℃反应1min；95℃反应15s；60℃反应15s。