[发明专利]检测ESR1基因突变的引物组、试剂、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种检测ESR1基因突变的引物组，其特征在于，其包括如下引物组合中的任意一种或多种：引物组合1、引物组合2和引物组合3；

其中，引物组合1包括：SEQ ID NO.12所示的下游引物、SEQ ID NO.15所示的特异性探针以及选自SEQ ID NO.1-9中任意一种或几种的上游引物；

引物组合2包括：SEQ ID NO.13所示的下游引物、SEQ ID NO.16所示的特异性探针以及SEQ ID NO.10所示的上游引物；

引物组合3包括：SEQ ID NO.14所示的下游引物、SEQ ID NO.17所示的特异性探针以及SEQ ID NO.11所示的上游引物。

2.根据权利要求1所述的检测ESR1基因突变的引物组，其特征在于，所述引物组还包括质控引物，所述质控引物的碱基序列如SEQ ID NO.18所示。

3.根据权利要求1或2所述的检测ESR1基因突变的引物组，其特征在于，每个引物组合中的特异性探针的两端分别带有荧光报告基团和荧光淬灭基团；

优选地，所述荧光报告基团选自FAM、VIC、ROX、CY3或CY5中的任意一种；

优选地，所述荧光淬灭基团选自TAMRA、BHQ1、BHQ2或NFQ中的任意一种；

优选地，每个引物组合的特异性探针连接有MGB修饰基团，所述MGB修饰基团与所述荧光淬灭基团连接。

4.一种检测ESR1基因突变的试剂，其特征在于，其包括权利要求1-3任一项所述的引物组。

5.一种检测ESR1基因突变的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-3任一项所述的引物组，或者权利要求4所述的试剂。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR缓冲液和/或酶混合液；

优选地，所述PCR缓冲液中包括PCR添加剂、MgCl₂或dNTPs中的至少一种；

优选地，所述PCR添加剂包括DMSO、甘油或BSA中的至少一种；

优选地，所述MgCl₂的浓度为1-5mM；

优选地，所述MgCl₂的浓度为3mM；

优选地，所述dNTPs包括dATP、dCTP、dGTP和dUTP；

优选地，所述dATP、所述dCTP、所述dGTP和所述dUTP的浓度均独立地为0.1-0.5mM；

优选地，dATP、dCTP、dGTP和dUTP的浓度分别为0.15mM、0.15mM、0.15mM、0.3mM；

优选地，所述酶混合液包括Taq酶和UNG酶；

优选地，所述Taq酶和所述UNG酶在PCR体系预混液的总量比为：(0.5U-1.0U)：(0.1U-0.5U)；

优选地，所述Taq酶和所述UNG酶在PCR体系预混液的总量比为：0.5U：0.2U。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照液和/或空白对照液；

优选地，所述阳性对照液包括突变质粒，所述突变质粒含有突变片段，所述突变片段选自SEQ ID NO.19-29中的任意一种；

优选地，所述阳性对照液为含11种突变质粒的混合液，11种突变质粒分别含有SEQ IDNO.19-29所示的突变片段；

优选地，所述阳性对照液的突变质粒浓度为2000-3000copies/μL；

优选地，所述空白对照液包括Tris-HCl缓冲液；

优选地，所述Tris-HCl缓冲液的浓度为7-13mM，pH为7.5-8.5。

8.一种检测ESR1基因突变的方法，其特征在于，其包括：往含有权利要求1-3任一项所述的引物组的PCR反应体系中加入待测样本的DNA模板，进行PCR扩增；

优选地，所述方法利用权利要求5-7任一项所述的试剂盒进行；

优选地，所述DNA模板来源于组织样本或血浆样本，更优选为血浆样本。