[发明专利]一种异黄酮O-甲基转移酶GmIOMT3及编码基因及应用有效
| 申请号： | 201910798929.6 | 申请日： | 2019-08-28 |
| 公开（公告）号： | CN110438101B | 公开（公告）日： | 2020-11-06 |
| 发明（设计）人： | 刘江;陈建华;周诚;谢丛薇;肖新力;杨才琼;李晓曼;肖媛;黄祥庆;杜俊波;张静;王小春;杨峰;武晓玲;杨文钰 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12P17/06 |
| 代理公司： | 成都九鼎天元知识产权代理有限公司 51214 | 代理人： | 易小艺 |
| 地址： | 611131 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 异黄酮 甲基转移酶 gmiomt3 编码 基因 应用 | ||
1.一种异黄酮O-甲基转移酶GmIOMT3或其编码基因的应用，其特征在于：所述异黄酮O-甲基转移酶GmIOMT3或其编码基因在以染料木素为底物制备鹰嘴豆素A中的应用；所述异黄酮O-甲基转移酶GmIOMT3的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的一种异黄酮O-甲基转移酶GmIOMT3或其编码基因的应用，其特征在于：鹰嘴豆素A的制备方法包括以下步骤：
(1)获取转移酶GmIOMT3蛋白质并纯化；
(2)配制催化反应体系：反应体系以100μL计算：其中包括Tris-HCl缓冲液180-220mM，S-腺苷甲硫氨酸0.9-1.1mM，DTT(二硫苏糖醇)3-5mM，MgCl2 0.8-1.2mM，转移酶GmIOMT3 7-9μg，染料木素0.15-0.25mM，ddH2O(双蒸水)补齐至100μL，pH值为7.9-8.2；
(3)在温度37℃反应30min，加入100μL乙腈终止反应；
(4)步骤(3)终止反应后的溶液经提纯后即得鹰嘴豆素A。
3.根据权利要求2所述的异黄酮O-甲基转移酶GmIOMT3或其编码基因的应用，其特征在于：所述反应体系以100μL计算：其中包括Tris-HCl缓冲液200mM，S- 腺苷甲硫氨酸 1 mM，DTT 4mM，MgCl2 2mM，转移酶GmIOMT3 8μg，染料木素0.2mM，ddH2O补齐至100μL。
4.根据权利要求1所述的异黄酮O-甲基转移酶GmIOMT3或其编码基因的应用，其特征在于：编码异黄酮O-甲基转移酶GmIOMT3的基因在以染料木素为底物的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。
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