[发明专利]一种葡萄膜黑色素瘤转移风险预测试剂盒

说明书

本发明提供了一种新的葡萄膜黑色素瘤转移风险预测试剂盒，属于疾病分子诊断试剂盒领域。本发明阐述了EZH2基因p.E725K突变位点与葡萄膜黑色素瘤转移之间的关系；提供了一类新的试剂盒，该类试剂盒借助EZH2基因p.E725K突变位点的检测来实现葡萄膜黑色素瘤转移风险有效预测，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于疾病分子诊断试剂盒领域。

背景技术

葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma，UM)是成人最常见的原发性眼内恶性肿瘤，其发病率占眼内肿瘤的首位，可累及脉络膜、虹膜及睫状体，以脉络膜黑色素瘤最为多见。恶性程度高，预后差，不仅可导致视力丧失，还会发生肝脏、肺等部位的远端转移，严重威胁患者的生命，其10年疾病相关生存率仅为50％。

在过去三十年间，UM的诊断及治疗均有显著的进步，DecisionDx-UM检测可把UM病人分为Class 1(低转移风险)及Class 2(高转移风险)不同的类别。UM的主要治疗方法为短距离敷贴放疗、激光治疗、局部切除及眼球摘除等，但患者的5年生存率仍未见提高。究其原因在于即使局部治疗成功，仍有50％的患者发生远端转移(其中肝脏60.5％、肺24.4％、皮肤等软组织10.9％及骨8.4％)，说明UM的早期转移是影响患者生存期的重要因素，阻止肿瘤细胞的早期转移是延长UM生存期的关键，对治疗UM具有极其重要的价值和意义。

目前UM发生及转移的机制目前尚不完全明确，经典的UM发病机制为基因突变及染色体异常，包括1、3、6、8号染色体的丢失或获得。UM中关键的驱动基因包括GNAQ(G proteinsubunit alpha q)/GNA11(G protein subunit alpha 11)、BAP1(BRCA1 associatedprotein 1)、EIF1AX(translation initiation factor 1A，X-linked)、SF3B1(splicingfactor 3b subunit 1)、PLCB4(phospholipase C β4)和CYSLTR2(cysteinyl leukotrienereceptor 2)等。这些基因的突变与UM的发生及转移密切相关，针对这些基因参与的信号通路(如RAS-ERK、MAPK、PI3K/Akt及Hippo pathway)的小分子抑制剂药物已经进入临床，但这小分子抑制剂药物有效期一般仅为6-8个月，延长使用期可能会导致复发，极大的限制了这类药物在临床上的应用，并且这类靶向治疗仍不能完全减少UM患者转移，因此找需要寻新的分子靶点对UM进行治疗。

近年来研究表明，UM的发生与DNA甲基化、组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化、微小RNA(microRNAs)及长非编码RNA(lncRNAs)等表观遗传学调控相关，其中组蛋白甲基化酶EZH2(Enhancer of zeste homolog 2)是肿瘤发生及转移的关键表观调控因子。EZH2是PRC2(Polycomb repressive complex 2)的组分，定位于人染色体7q35位置，与Embryonicectoderm development(EED)和Suppressor of zeste homologue 12(SUZ12)共同组成PRC2复合体，具有组蛋白甲基转移酶(Histonemethyltransferase，HTMase)作用，可对核小体组蛋白H3的Lys27位点进行甲基化(H3K27me3)，介导转录抑制，实现基因沉默，参与调节细胞的增殖、分化及肿瘤形成。

目前研究报道EZH2在结直肠癌、黑色素瘤、口腔鳞癌、乳腺癌、胆管癌、肺癌、肝癌、膀胱癌、淋巴瘤等多种肿瘤中高表达，而在正常组织中低表达或者不表达，EZH2在多种肿瘤中存在突变，EZH2的表达与肿瘤的恶性特征、转移及患者的预后有关。EZH2与UM的关系尚不明确，在UM细胞株中仅有2篇报道，EZH2可沉默IFN-γ诱导MHC2TA的转录水平；UM细胞株对EZH2抑制剂EPZ-6438存在抗药性，其机制尚不明确。在UM病人中仅有1篇报道，在89例UM病人中，EZH2高表达可增加转移的风险，缩短生存时间，是UM的潜在治疗靶点。