[发明专利]肠癌细胞免疫禽类获得针对肠癌IgY抗体偶联广谱抗癌药物制备方法和防治肠癌应用

说明书

本发明专利的目的在于，提供一种抗体药物偶联物新药，Igγ抗体偶联广谱抗癌药物的制备方法。以肠癌细胞做为免疫原，免疫禽类获得针对肠癌Igγ抗体，用多种化疗药物、多种不同的方法，修饰抗大肠癌的鸡Igγ抗体，提供一种可口服的双功能抗体的制备方法。口服抗体药物偶联物新药后，可与大肠癌结合且具有抗大肠癌的细胞毒性，降低化疗药物的耐药性和毒副作用。

技术领域：本发明涉及治疗性双功能抗体领域，涉及用于抗大肠癌的鸡IgY抗体及其修饰方法。

背景技术：

结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是世界范围内最为常见的恶性肿瘤之一，发病率占胃肠道肿瘤的前列，随着经济发展和人民生活水平的提高，生活方式和饮食结构的改变，我国结直肠癌的发病率呈逐年上升的趋势。2008年全球约有结直肠癌新发病例120万，约占所有新发癌症的10％，其相关死亡人数超过 60万。结直肠癌在北美、西欧、澳大利亚等经济发达的国家和地区十分常见，粗发病率达4/万，占所有新发病例的三分之二以上。此外，结直肠癌的死亡率非常高，主要是由于频发的术后转移和对化疗药物产生的多重耐药性造成的，故而，寻找有效的治疗结直肠癌的药物已经成为临床亟待解决的重要问题。

虽然结直肠癌对人们的健康和社会产生的负担依然沉重，但是近二十年在其治疗领域取得了较大进展，5年生存率由过去的50％提高到了63％，患者的生活质量也得到了显著改善。上述成绩很大程度归因于结直肠癌药物治疗方面取得的突破性进展以及合理的规范化用药。20世纪50年代以来，氟尿嘧啶一直作为结直肠癌治疗的基本化疗药物广泛应用于临床。90年代中后期，新的高效化疗药物如奥沙利铂、伊立替康、卡培他滨以及分子靶向药物西妥昔单抗和贝伐株单抗的相继研发上市，使得结直肠癌在药物治疗方面取得了长足进步。

近年来，以癌细胞上的抗原蛋白质为靶、用于治疗癌的各种抗体药物在世界上兴起，作为癌特异性治疗药获得了一定的药效而受到关注。以癌细胞表面特异性地表达的癌抗原为靶的抗体作为药物，可以期待实现副作用更少的药物治疗。抗体药物以高特异性、高稳定性和低毒性等优点成为现代生物药物发展的中流砥柱，几乎每一株抗体都被寄予希望成为“重磅药物”而诞生。在抗肿瘤治疗中，抗体药物也已成为标准疗法，但其单独使用的疗效常常不尽如人意。近年来，抗体与小分子药物的一体化联姻——抗体药物偶联物新药，获得了突破性进展，极有可能成长为抗体肿瘤疗法中新一代重磅药物。

抗体-药物偶联物(ADCs)是一类将小分子细胞毒性药物偶联于抗体的药物，由单抗、化学药物及连接物，3部分共同组成。ADCs利用单抗将小分子药物靶向输送至肿瘤部位，并通过细胞内吞效应进入溶酶体，释放出细胞毒性小分子药物，从而达到专一杀死肿瘤细胞而不损伤正常组织细胞的作用，兼具抗体的高特异性和细胞毒药物对肿瘤的高毒性。

鸡卵黄IgY抗体研究：用抗原免疫产蛋母鸡后，鸡可产生相应的抗体并转移和积累于蛋黄中，从蛋黄中提取的抗体主要成分为IgY。IgY来源方便、经济，可大规模生产。目前，针对各种鸡的病毒性传染病的抗体，如抗传染性囊病蛋黄抗体、抗新城疫抗体等已得到了广泛的应用，收到了很好的防治效果。在医学和食品科学领域，利用某种特定病原体免疫鸡产生特异性抗体，作为口服制剂和食品添加剂，用于预防和治疗小儿轮状病毒性腹泻、大肠杆菌性腹泻、龋齿等均收到了良好效果。因此，如何开发和利用IgY将越来越受到重视。

鸡卵黄IgY理化性质、生物学特性研究：(1)温度对IgY活性的影响，有试验表明，从抗新城疫病毒的蛋黄当中提取的IgY，经65℃处理1h其效价基本维持不变。这提示采用一定的消毒方法如巴氏消毒 (60℃，30分钟)对其进行处理既可消灭一定的病原体又可维持抗体活性，这为鸡蛋黄IgY的提取和精深加工生产提供了指导。(2)酸性环境，有试验表明，在pH3-11的环境中，IgY仍保持较高的活性，说明它具有很强耐受酸碱的能力。(3)蛋白酶，在体外模拟试验中，IgY在经过胃蛋白酶、胰蛋白酶处理后，仍保持较高的活性，说明它具有一定抗消化道蛋白酶酶解作用；经口摄人后在消化道内能保持活性，有效杀灭存在于动物和人消化道内的病原体。(4)适合大规模生产。Hansen等研究表明，高免卵黄的效价水平在产蛋鸡可维持2月之久。