[发明专利]一种葡萄砧木的组培快繁方法

说明书

本发明涉及植物组织培养及育苗技术领域，特别涉及一种葡萄砧木的组培快繁方法。该方法包括如下步骤：取葡萄砧木的休眠枝条，剪成单芽茎段，打破生理休眠，将单芽茎段水培至萌发，待新梢长度至10～20cm时采样，得到外植体；剪切外植体的顶端和基部伤口，接种于启始培养基中进行启始培养；待新梢长至5～6cm时，将新稍接种于增殖培养基中进行增殖培养，每40～50d继代一次，继代培养3～4代；选取组培苗进行炼苗、移栽。本发明的启始培养基可显著诱导葡萄砧木的茎段长出新梢或丛生芽。本发明增殖培养基经过启始培养的新梢或丛生芽可经增殖培养同时萌芽和生根一步诱导成苗，只需配制一种增殖培养基，提高了繁殖效率。

技术领域

本发明涉及植物组织培养及育苗技术领域，特别涉及一种葡萄砧木的组培快繁方法。

背景技术

近年来，我国葡萄种植面积大大提高，葡萄产业发展迅速。我国的葡萄种植以传统自根苗为主要栽培方式，但嫁接苗由于其抵抗病虫害，尤其是抗葡萄根瘤蚜的特性，使得嫁接这种栽培方式逐步受到重视。在葡萄嫁接苗中，两个嫁接到一起的联合体的新梢部分称为接穗，而砧木则提供根系。优良砧木除可增强抗逆能力外，还可促进接穗生长，影响葡萄的品质及风味。因此快速繁殖获得无病毒的优质葡萄砧木品种苗木并能在田间大规模应用就显得尤为重要，组织培养与驯化移栽技术正好能满足这一要求。目前我国已筛选和引进了许多优良葡萄砧木品种，其中就包括适应性广，抗性突出的砧木品种‘101-14’、‘SO4’和‘110R’。葡萄砧木‘101-14’亲本为河岸葡萄×沙地葡萄(Vitis riparia×Vitisrupestris)，根瘤蚜、根结线虫抗性强，耐冷害，易于繁殖。葡萄砧木‘SO4’亲本为冬葡萄×河岸葡萄(Vitis berlandieri×Vitis riparia)，根瘤蚜、根结线虫抗性强，抗寒、耐旱且抗湿涝，嫁接亲合力强。葡萄砧木‘110R’，其亲本为冬葡萄×沙地葡萄(Vitis berlandieri×Vitis rupestris)，根瘤蚜抗性强，耐旱。葡萄砧木品种的组培快繁技术可以在短时间内快速繁殖得到优质苗木，驯化移栽技术则可以显著提高育苗效率，解决大规模育苗的难题。

欲通过组织培养技术快速繁殖葡萄砧木，需要选取合适的外植体材料，设置适当的培养基组分及植物生长调节剂浓度，并给予其适宜的温度、光照培养条件。在驯化移栽组培苗的过程中，需要经过炼苗过程，使组培苗逐渐适应大田环境，提高移栽成活率。

目前，葡萄砧木的组培快繁技术常采用如下技术：选用的外植体来自其生长季的‘SO4’和‘贝达’的半木质化新梢，剪取枝条为5～6cm的长度，在自来水流水冲洗枝条1h后，用75％酒精浸泡30s，再用0.1％HgCl₂灭菌7～8min，无菌水清洗3次，消毒后剪切成2cm左右带节间的茎段用于后续组培。茎段在启动培养基1/2MS+IBA 0.2mg/L上培养25d，既有芽又有根的分化，在增殖培养基MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L上培养35d左右即可产生丛生芽，随后转入生根培养基1/2MS+IBA0.2mg/L培养25d左右便有根的发生。上述培养基均添加25g/L的蔗糖，5.5～6g/L的琼脂，5.8的pH值，培养环境为温度25±2℃、光照时间14h/d、光照强度1500-2000Lx。在葡萄砧木组培苗的植株高度达5cm以上、根长3-8cm、根数5-7根时，将其在室内(或大棚内)自然光下炼苗3-5d，再开瓶炼苗7d后，取苗出瓶并洗净根上的琼脂后将苗移栽入珍珠岩中，并且盖塑料薄膜保持叶片湿度，避免强光直射，室温25℃左右，珍珠岩中假植15-20d，再移栽定植于疏松的地里。

在现有葡萄砧木组培快繁技术中，外植体只能在生长季取材，取材有时间季节的限制，且消毒外植体的消毒剂有毒性，实际操作不方便。并且组培苗的增殖培养基与生根培养基成分不同，操作复杂。在组培苗的驯化移栽方面则需借助其他材料，操作不方便，应用成本高。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种葡萄砧木的组培快繁方法。该葡萄砧木组培快繁技术利用休眠枝条经水培的新梢为外植体，保证了外植体取材便利，不受季节和时间的限制，且可以大大提高组培苗移栽至田间的成活率，提升大规模田间育苗的效率。