[发明专利]一种苓桂术甘药物组合物、制备方法及检测方法

权利要求书

1.一种苓桂术甘药物组合物，其特征在于，该药物组合物配方由以下组成：茯苓8～15份、桂枝7～11份、白术7～11份、甘草4～8份；

其制备方法如下：

(1)称取重量份的药物，备用；

(2)煎煮：加水220～260ml,以明火方式加热，加盖煎煮，武火煮沸转为小火煎煮保持微沸，煎煮30～40分钟；

(3)滤过：煎煮至120ml，200～300目滤布趁热滤过；

(4)滤液经冷冻干燥，干燥条件为：预冻温度：-20～-45℃，冷冻干燥温度-50～-70℃，真空度＜300Pa，收集干膏粉；

(5)加入药学上可接受的辅料制成药学上可接受的剂型。

2.根据权利要求1所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)称取重量份的药物，备用；

(2)煎煮：加水240ml,以明火方式加热，加盖煎煮，武火煮沸转为小火煎煮保持微沸，煎煮35分钟；

(3)滤过：煎煮至120ml，200目滤布趁热滤过；

(4)滤液经冷冻干燥，干燥条件为：预冻温度：-20～-45℃，冷冻干燥温度-50～-70℃，真空度＜300Pa，收集干膏粉；

(5)加入药学上可接受的辅料制成药学上可接受的剂型。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物由以下配方组成：茯苓12份、桂枝9份、白术9份、甘草6份。

4.根据权利要求1～2任一项所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物还包括用药学上可接受的辅料制成药学上可接受的剂型。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述剂型为颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、注射剂、膏剂。

6.一种检测权利要求1～5任一项所述药物组合物的方法，其特征在于，所述检测方法包括鉴别、指纹图谱、含量测定；具体如下：

鉴别(1)取本品0.5～1.5g，加水10ml使溶解，用乙醚振摇提取1～3次，每次20～30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醚2ml使溶解，作为供试品溶液，另取桂枝对照药材1g，加水45～55ml，煎煮25～35分钟，滤过，滤液同法制成对照药材溶液，再取肉桂酸对照品，用甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液及对照药材溶液各5μl，供试品溶液3μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以比例为5:5:0.3的环己烷-乙醚-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)取本品1g，加水35～45ml，超声处理25～35分钟，滤过，滤液用乙醚振摇提取1～3次，每次7～13ml，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇振摇提取2～4次，每次15～25ml，合并正丁醇液，用氨试液振摇提取1～3次，每次25～35ml，合并氨试液，用盐酸调pH值至3～4；再用乙酸乙酯振摇提取1～3次，每次25～35ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加水45～55ml，煎煮25～35分钟，滤过，同法制成对照药材溶液；再取甘草苷对照品，加70％乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、对照药材溶液及供试品溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水在5～10℃放置的下层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光和365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；

指纹图谱 照中国药典2015年版四部通则0512高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05％磷酸溶液为流动相B，按规定的流动相梯度洗脱程序进行梯度洗脱；检测波长为260nm；理论板数按肉桂酸峰计算应不低于5000；流动相梯度洗脱程序如下：

参照物溶液的制备 取肉桂酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本品0.5～1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇15～25ml，称定重量，用功率250W，频率40kHz超声处理25～35分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得；

供试品指纹图谱中应呈现与参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰，供试品色谱图应与对照指纹图谱基本一致，有相对应的15个共有峰，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统，以共有峰计算相似度，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90，对照指纹图谱见图25；

含量测定 桂枝照中国药典2015年版四部通则0512高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为34：66的乙腈-0.5％磷酸溶液为流动相；检测波长为276nm；理论板数按肉桂酸峰计算应不低于7000；

对照品溶液的制备 取肉桂酸对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本品0.2～0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇45～55ml，称定重量，以功率250W，频率40kHz超声处理25～35分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品按干燥品计算，每g含桂枝以肉桂酸C₉H₈O₂计，应为0.50～2.0mg；

甘草 照中国药典2015年版四部通则0512高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按规定的流动相梯度洗脱程序进行梯度洗脱；检测波长237nm；理论塔板数按甘草苷峰计算应不低于5000；流动相梯度洗脱程序如下：

对照品溶液的制备 取甘草苷，甘草酸铵对照品适量，精密称定，加50％乙醇制成每1mL含甘草苷20μg和甘草酸铵0.1mg的溶液，即得；所述甘草酸重量＝甘草酸铵重量/1.0207；

供试品溶液的制备 取本品0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％乙醇25ml，称定重量，以功率500W，频率40kHz超声处理25～35分钟，放冷，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品按干燥品计算，每g含甘草以甘草苷C₂₁H₂₂O₉计，应为5.0～15.0mg，以甘草酸C₄₂H₆₂O₁₆计，应为5.0～30.0mg。

7.根据权利要求6所述药物组合物的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

鉴别(1)取本品1g，加水10ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醚2ml使溶解，作为供试品溶液，另取桂枝对照药材1g，加水50ml，煎煮30分钟，滤过，滤液同法制成对照药材溶液，再取肉桂酸对照品，用甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液及对照药材溶液各5μl，供试品溶液3μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以比例为5:5:0.3的环己烷-乙醚-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)取本品1g，加水40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液用乙醚振摇提取2次，每次10ml，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液振摇提取2次，每次30ml，合并氨试液，用盐酸调pH值至3～4；再用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加水50ml，煎煮30分钟，滤过，同法制成对照药材溶液；再取甘草苷对照品，加70％乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、对照药材溶液及供试品溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水在5～10℃放置的下层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光和365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；

指纹图谱 照中国药典2015年版四部通则0512高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05％磷酸溶液为流动相B，按规定的流动相梯度洗脱程序进行梯度洗脱；检测波长为260nm；理论板数按肉桂酸峰计算应不低于5000；流动相梯度洗脱程序如下：

参照物溶液的制备 取肉桂酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本品0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇20ml，称定重量，用功率250W，频率40kHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得；

供试品指纹图谱中应呈现与参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰，供试品色谱图应与对照指纹图谱基本一致，有相对应的15个共有峰，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统，以共有峰计算相似度，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；对照指纹图谱见图25；

含量测定 桂枝照中国药典2015年版四部通则0512高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为34：66的乙腈-0.5％磷酸溶液为流动相；检测波长为276nm；理论板数按肉桂酸峰计算应不低于7000；

对照品溶液的制备 取肉桂酸对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本品0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，以功率250W，频率40kHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品按干燥品计算，每g含桂枝以肉桂酸C₉H₈O₂计，应为0.50～2.0mg；

甘草 照中国药典2015年版四部通则0512高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按规定的流动相梯度洗脱程序进行梯度洗脱；检测波长237nm；理论塔板数按甘草苷峰计算应不低于5000；流动相梯度洗脱程序如下：

对照品溶液的制备 取甘草苷，甘草酸铵对照品适量，精密称定，加50％乙醇制成每1mL含甘草苷20μg和甘草酸铵0.1mg的溶液，即得；所述甘草酸重量＝甘草酸铵重量/1.0207；

供试品溶液的制备 取本品0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％乙醇25ml，称定重量，以功率500W，频率40kHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品按干燥品计算，每g含甘草以甘草苷C₂₁H₂₂O₉计，应为5.0～15.0mg，以甘草酸C₄₂H₆₂O₁₆计，应为5.0～30.0mg。