[发明专利]一种东毕吸虫病检测用虫卵抗原的制备及胶体金标记的检测试纸条

说明书

本发明涉及一种东毕吸虫病检测用虫卵抗原的制备及胶体金标记的检测试纸条，所述的东毕吸虫抗体检测胶体金免疫试剂条设有样品吸垫、金标垫、NC膜、吸收垫、PVC底板、检测线(T线)、控制线(C线)，所述胶体金标记的检测试纸条的硝酸纤维素膜上包被有上述的东毕吸虫虫卵纯化抗原作为检测物质。本发明提供的这种检测试剂条检测效果准确可靠，操作简便易行，成本降低，更适用于东毕吸虫病低度流行区现场流行病学调查、疾病筛查以及免疫学诊断，适于大规模推广应用。

技术领域

本发明涉及蛋白纯化和检测技术领域，特别涉及一种东毕吸虫病检测用虫卵抗原纯化和抗体检测技术领域，具体是指一种东毕吸虫虫卵粗抗原纯化方法、相关的纯化抗原和血吸虫抗体检测胶体金试纸条。

背景技术

东毕吸虫病是由东毕吸虫寄生于宿主的门静脉和肠系膜静脉引起的一种血吸虫病。呈世界性分布。亚洲的印度、蒙古、伊拉克、哈萨克斯坦和欧洲的俄罗斯、法国等国都有此病的发生。在我国，东毕吸虫病主要分布在甘肃、新疆、四川、贵州、内蒙、黑龙江等广大地区。

东毕吸虫细分为彭式东毕吸虫、程式东毕吸虫、土耳其斯坦东毕吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫结节变种。东毕吸虫发育过程需要经过两个宿主：终宿主和中间宿主。东毕吸虫尾蚴钻入终宿主牛、羊等家畜皮肤后，经过移行，最终发育成合抱的成虫，并在宿主血管内产卵；虫卵由血管进入肠道，随着粪便排出体外，在水体中孵化出毛蚴；毛蚴进入中间宿主耳萝卜螺体内进行无性繁殖，产生大量的尾蚴；成熟的尾蚴释放到水中，遇到适宜宿主即可钻入宿主皮肤，完成东毕吸虫的生活史循环。

家畜一旦感染东毕吸虫，由于东毕吸虫幼虫在体内移行，常造成宿主组织的机械性损伤；在成虫期和产卵过程中不仅争夺营养物质还产生毒素，影响牲畜的正常身体机能。羔羊表现严重营养不良，食欲不振，精神萎靡，发育滞缓，下肢水肿无力，排出稀便或血便，逐渐消瘦最终倒地不起；母羊还会不孕或流产、死胎。家畜东毕吸虫病不仅严重损害牧民的经济利益，而且尾蚴也能感染人类，产生尾蚴性皮炎，危害人类的身体健康，因此，东毕吸虫病是一种重要的人畜共患寄生虫病。

传统的东毕吸虫病诊断为病原学诊断，主要是依据尸体剖检和虫卵检查，包括粪便水洗沉淀法，虫卵毛蚴孵化法等。然而病原检查耗时较长且检出率低，造成一定的漏检率，影响对该病的控制。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种东毕吸虫虫卵及虫卵抗原纯化方法、相关的纯化抗原和血吸虫抗体检测胶体金免疫试纸条，该东毕吸虫虫卵抗原纯化方法设计巧妙，操作简便，由此得到的纯化抗原作为东毕吸虫抗体检测抗原，可以减少血清用量，增加检测灵敏度，降低交叉反应率，扩大应用范围，检测效果准确可靠，操作简便易行，成本降低，更适用于东毕吸虫流行区现场流行病学调查、疾病筛查以及免疫学诊断，适于大规模推广应用。

为了实现上述目的，在本发明的第一方面，提供了东毕吸虫虫卵收集方法，其特点是，采用粪孵法判断是东毕吸虫感染羊后，对羊进行解剖获得小肠进行虫卵收集。

优选的，利用NaOH消蚀法提高虫卵收集效率。

进一步的，本发明提供了东毕吸虫虫卵可溶性抗原的提取方法。

较佳地，东毕吸虫虫卵置于研磨器中，按照1:1-5的体积比加入生理盐水，研磨器内粉碎，镜检无完整虫卵；-40℃至10℃反复冻融3次，冰上超声，超声2秒间隔9秒，共0.5-2小时，超声后12000r/min离心5分钟，取可溶性上清，即为虫卵可溶性抗原粗提物，-20℃冻存。生产前，将虫卵可溶性抗原再次12000r/min离心5分钟，上清BCA法测蛋白浓度。

进一步的，本发明提供了一种东毕吸虫虫卵纯化抗原，其特点是，采用上述的东毕吸虫虫卵粗抗原纯化方法制备而成。

进一步的，本发明提供了上述的东毕吸虫虫卵纯化抗原在制备检测血吸虫抗体的检测产品中的应用。