[发明专利]一种蛋白质除盐方法及其应用在审
| 申请号： | 201910804753.0 | 申请日： | 2019-08-28 |
| 公开（公告）号： | CN110501409A | 公开（公告）日： | 2019-11-26 |
| 发明（设计）人： | 赵海义;华权高;李立;陈亚运;赵慧芳;陶亦楠;舒芹;张雪娇 | 申请（专利权）人： | 武汉金开瑞生物工程有限公司 |
| 主分类号： | G01N27/447 | 分类号： | G01N27/447;G01N1/34 |
| 代理公司： | 42242 武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙) | 代理人： | 严超<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖开发区高新大道*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 磷酸化修饰 除盐 润湿 蛋白质组 富集 蛋白质 蛋白质损失 蛋白质样品 标记技术 种蛋白质 冲洗液 非标记 吸附柱 洗脱液 抽干 平衡 洗脱 肽段 冲洗 应用 溶解 | ||
1.一种蛋白质除盐方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)先用TFA溶解蛋白质样品，离心取上清；
(2)用ACN润湿Zip Tip，再用TFA进行平衡；
(3)采用步骤(2)中润湿和平衡后的Zip Tip数次吹吸使得步骤(1)中的样品至少通过吸附柱2次；再用冲洗液TFA进行冲洗；
(4)再用洗脱液洗脱肽段；
(5)SpeedVac抽干样品。
2.根据权利要求1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，步骤(1)中TFA与蛋白质样品的用量比例为：每100μg蛋白质用40-60μl 0.2％TFA溶液溶解。
3.根据权利要求1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，步骤(1)中TFA的终浓度为0.1％-1％，pH＜4。
4.根据权利要求1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，步骤(2)中的ACN的质量浓度为40-60％，TFA的质量浓度为0.05-0.15％。
5.根据权利要去1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，步骤(3)中冲洗液TFA的浓度为0.05-0.15％。
6.根据权利要求1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，步骤(4)中洗脱液为含有40-60％ACN和0.05-0.15％TFA的混合液。
7.根据权利要求1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)用0.2％TFA溶液溶解样品，TFA的终浓度为0.1-1％，pH＜4，离心取上清；
(2)反复用50％ACN润湿液润湿Zip Tip，再用0.1％TFA平衡；
(3)采用步骤(2)中润湿和平衡后的Zip Tip数次吹吸使得步骤(1)中的样品至少通过吸附柱2次；再用0.1％TFA冲洗液进行冲洗；
(4)再用含有50％ACN和0.1％TFA的混合液洗脱肽段；
(5)SpeedVac抽干样品。
8.根据权利要求1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)用0.2％TFA溶液溶解样品，TFA的终浓度为0.1-1％，pH＜4，离心取上清；
(2)反复用50％ACN润湿液吹吸15次润湿Zip Tip，再用0.1％TFA洗吹10次平衡；
(3)采用步骤(2)中润湿和平衡后的Zip Tip数次吹吸使得步骤(1)中的样品至少通过吸附柱2次；再用0.1％TFA冲洗液吹打5次进行冲洗；
(4)再用含有50％ACN和0.1％TFA的混合液反复吹打15次洗脱肽段；
(5)SpeedVac抽干样品。
9.如权利要求1所述的蛋白质除盐方法的应用，其特征在于，蛋白质经过磷酸化修饰肽富集处理后，再经过除盐处理，用于标记蛋白质组学的研究技术中。
10.根据权利要求9所述的蛋白质除盐方法的应用，其特征在于，标记蛋白质组学的研究技术为iTRAQ或TMT标记定量蛋白质组技术。
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