[发明专利]用于检测人CYP2C19基因分型的引物探针组合物、试剂、试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种用于检测人CYP2C19基因分型的引物探针组合物、试剂、试剂盒及检测方法，属于基因检测技术领域，本发明所揭示的引物探针组合物中第一引物探针预混液含有SEQ ID NO.1～4所示核苷酸序列的引物与探针，第二引物探针预混液含有SEQ ID NO.5～8所示核苷酸序列的引物与探针，第三引物探针预混液含有SEQ ID NO.9～12所示核苷酸序列的引物与探针。本发明所揭示的引物探针组合物通过荧光定量PCR扩增，能够有效地区分CYP2C19*2、CYP2C19*3与CYP2C19*17这三种基因分型，具有特异性强、灵敏度高、操作简单快速等优点，并能够缩短检测时间并降低对CYP2C19基因分型检测的检测成本，从而能够为个体化用药提供准确的依据，提高了基因分型检测的准确性。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其涉及一种用于检测人CYP2C19基因分型的引物探针组合物、试剂、试剂盒及检测方法。

背景技术

CYP2C19是细胞色素P450(CytochromeP450,CYP)酶系的重要一员。P450同功酶也称药酶，是由一系列结构和功能相关的酶组成的酶家族，是体内药物代谢的主要酶系。研究发现CYP2C19可影响到氯吡格雷、奥美拉唑、地西泮、苯妥英钠等许多重要临床应用药物的代谢，而其基因多态性是引起个体间和种族间对同一药物表现出不同代谢能力的原因之一。2010年美国FDA要求氯吡格雷药物标签上注明CYP2C19与疗效的关系，并建议使用前检测CYP2C19基因型。

编码正常酶活性的基因是CYP2C19*1型。CYP2C19*2型、CYP2C19*3型和CYP2C19*17型是中国人群中较常见的等位基因型。其中CYP2C19*2型和CYP2C19*3型可引起CYP2C19基因编码的酶活性丧失，代谢底物的能力减弱，使血药浓度增高，从而引起与血药浓度相关的药物不良反应，CYP2C19*17型可引起CYP2C19基因编码的酶活性增强，代谢底物的能力增强。对于药物代谢慢的人群，长期按正常剂量服用，就会出现严重毒副作用：主要是肝损害、造血系统损害、中枢神经系统损害等，严重时可导致死亡。根据CYP2C19基因型改变而引起酶代谢活性的改变，可将人群根据酶的代谢能力分为4类：超强代谢型，强代谢型，中间代谢型和弱代谢型。由于病人普遍存在动脉粥样硬化，尤其是支架内血栓的风险，正在或考虑接受抗血小板治疗(如氯吡格雷)。因此检查CYP2C19基因SNP类型，将有助于选择合适的抗血小板治疗方案。

目前检测基因多态性的方法有直接测序法、荧光定量PCR法和基因芯片法。直接测序法耗时长、敏感性低，费用高，因此在适用用于医院等场所进行使用。基因芯片法的基因测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。基因芯片法检测基因多态性不仅制备成本昂贵且所依赖的检测仪器的成本更加不菲，同时利用基因芯片测试CYP2C19基因分型时也需要耗时至少8小时，且容易存在容易出现假阳性的缺陷，即将阴性样本误判为阳性样本。

而荧光定量PCR法(qPCR)是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，标记跟踪PCR产物进行实时监测反应，利用与之相适应的软件对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。因此，相对于上述直接测序法与基因芯片法对CYP2C19基因位点是否发生突变(即基因分型)进行基因测序的过程中，荧光定量PCR法对CYP2C19基因位点的多态性检测具有特异性强、检测成本低廉、灵敏度高、准确性强等诸多优点。

发明内容