[发明专利]EMC3基因的应用及其定点敲除方法在审
| 申请号： | 201910806212.1 | 申请日： | 2019-08-28 |
| 公开（公告）号： | CN110607280A | 公开（公告）日： | 2019-12-24 |
| 发明（设计）人： | 谢胜松;赵书红;李新云;刘海龙;王子畅;赵长志;肖天贺;聂雄伟;张金福;阮进学;韩晓松 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/113;C12N15/867;C12N15/90;A61K45/00;A61P31/14 |
| 代理公司： | 42001 武汉宇晨专利事务所 | 代理人： | 江丽丽 |
| 地址： | 430074 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因 流行性乙型脑炎病毒 生物技术领域 乙型脑炎病毒 多序列比对 核苷酸序列 蛋白表达 高度保守 基因敲除 基因序列 宿主细胞 移码突变 乙型脑炎 编码区 肾细胞 细胞株 靶点 靶向 碱基 敲除 小鼠 猪源 修饰 增殖 诱导 入侵 感染 死亡 应用 分析 发现 开发 | ||
【权利要求书】：
1.EMC3基因的应用，其特征在于，缺失表达EMC3基因编码的蛋白，从而抑制流行性乙型脑炎病毒在宿主细胞中复制。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，基于CRISPR/Cas9系统敲除EMC3基因。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，CRISPR/Cas9系统采用的sgRNA靶向序列为EMC3基因第一外显子。
4.EMC3基因作为靶点在制备防治动物感染流行性乙型脑炎病毒的药物中的应用。
5.EMC3基因作为靶点在制备对流行性乙型脑炎具有抗性的基因编辑细胞或动物模型中的应用。
6.定点敲除EMC3基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）利用软件设计靶向EMC3基因编码区的特异sgRNA，将sgRNA片段克隆到载体上，构建带有GFP筛选标记的目的sgRNA表达载体；
（2）通过慢病毒包装及感染的方法将目的sgRNA表达载体导入到稳定表达Cas9蛋白的细胞中，利用流式细胞仪分选GFP阳性细胞，再通过TA克隆检测DNA序列和Western Blot技术检测EMC3蛋白的表达情况，挑选出EMC3蛋白缺失的基因敲除细胞株。
7.根据权利要求6所述的定点敲除EMC3基因的方法，其特征在于，采用的sgRNA的核苷酸序列为5′-CGATTGGCAGGACCACCCAGAGG-3′。
8.权利要求6所述方法制备的EMC3基因敲除细胞株。
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