[发明专利]一种大豆疫霉快速鉴定试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供一种大豆疫霉快速鉴定试剂盒及其制备方法，涉及植物病害生物防治领域，试剂盒内成分包括没食子儿茶素、儿茶素和表儿茶素，均能够与大豆疫霉产生橘红色物质，且儿茶素、没食子儿茶素和表儿茶素之间的占比为3.8‑4.5％、12.0‑15.5％和80‑84.2％，利用多酚只与大豆疫霉代谢产物发生反应的特点，将几种多酚物质利用实验和数据分析处理结合的方法得到几种多酚物质的最佳配比，便于大豆疫霉快速鉴定，且鉴定结果明显，便于观察。

技术领域

本发明涉及植物病害生物防治领域，尤其涉及一种大豆疫霉快速鉴定试剂盒及其制备方法。

背景技术

大豆疫霉病菌引起的大豆疫病是大豆生产中的毁灭性病害之一,是我国对外公布的一类植物检疫危险性病原真菌。该病菌以土壤传播为主。目前世界上的主要大豆输出国,如美国、巴西阿根廷等,均有大豆疫病的发生和分布,且在输出的商品大豆中经常夹带-定量的土壤。为防止该病菌传入我国，在进境植物检疫时,需规范并正确掌握大豆疫霉病茵的检疫鉴定方法，现有检测方法是根据大豆疫霉病菌的土壤传播特性,生物学特性形态学特征等特征,确定了检疫检测和鉴定大豆疫霉病茵的各项技术要求，检测原理为：病原真菌是典型的土壤习居菌，主要以抗逆性很强的卵孢子在土壤中和土壤中的寄主残体内越冬并长期生存。当田间温度和湿度适宜时,卵孢子打破休眠萌发产生孢子囊,雨后有积水时，孢子囊很快释放出大量游动孢子,游动孢子被雨水冲溅到寄土表面.或受寄主分泌物的吸引。朝根系游动并最终侵染寄主。有水时,在寄主根部外表形成大量孢子囊,在内部形成大量卵孢子,病原菌的这一特性,先收集土壤并在适宜条件下培养-定时间.使卵孢子萌发产生孢了囊,然后加水浸泡,使孢子囊释放出游动孢子,再加感病大豆品种的叶碟诱集游动孢了,待游动孢了侵染叶碟并在叶碟边缘(偶尔在叶碟表面)产生新的孢子囊并释放出游动孢子时,即可进行病原菌的分离和鉴定，但是此种检测方法较为复杂，耗时较长，观察困难，难以对大豆疫霉实施快速鉴定。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大豆疫霉快速鉴定试剂盒及其制备方法，以解决上述大豆疫霉检测速度慢的技术问题。

本发明为解决上述技术问题，采用以下技术方案来实现：一种大豆疫霉快速鉴定试剂盒及其制备方法，试剂盒内成分包括没食子儿茶素、儿茶素和表儿茶素，均能够与大豆疫霉产生橘红色物质，且儿茶素、没食子儿茶素和表儿茶素之间的占比为3.8-4.5％、12.0-15.5％和80-84.2％。

所述试剂盒制备包括如下步骤：

(1)在培养基中加入多酚物质，可以与大豆疫霉代谢物形成橘红色物质，而与其他疫霉不能形成该橘红色物质；

(2)从七种茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、没食子儿茶素(GC)、表没食子儿茶素(EGC)、儿茶素(C)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表儿茶素(EC)和没食子酸乙酯(EG)中，选择出没食子儿茶素、儿茶素和表儿茶素进行颜色色度实验。

(3)以数学模型优化组合三者配比，添加到培养基中得到颜色鲜亮的易于识别的橘红色沉淀物，利用Design-expert 7.0对试验数据进行分析处理得到没食子儿茶素、儿茶素和表儿茶素的最优配比；

(4)按照最优配比将混合试剂加到培养基中配制，灭菌、无菌倒小平板之后放于无菌容器中，即得到快速鉴定试剂盒。

利用Design-expert 7.0对试验数据进行分析处理所用回归方程为：Y＝90.6-0.25A+3.25B-0.75C-0.25AB-2.25AC+3.75BC-3.42A²-3.92B²-5.43C²。

本发明的有益效果是：