[发明专利]一种仿生三维DPCs独立共培养体系及其构建方法

权利要求书

1.一种仿生三维DPCs独立共培养体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S10、准备毛乳头细胞(DPCs)、真皮鞘细胞(DSCs)及毛母质细胞(HGMCs)单细胞悬液；

S20、提供Matrigel，将所述DPCs单细胞悬液加入所述Matrigel，经重悬形成Matrigel-DP细胞悬浮液；

S30、使所述Matrigel-DP细胞悬浮液粘附于Transwell小室的微孔膜，制得三维DPCs培养体系；

S40、在所述三维DPCs培养体系的Transwell小室的上室中接种HGMCs，同时在所述三维DPCs培养体系的Transwell小室的下室中接种DSCs，然后加入培养基，制得仿生三维DPCs独立共培养体系。

2.根据权利要求1所述的仿生三维DPCs独立共培养体系的构建方法，其特征在于，步骤S10具体包括以下步骤：

S11、提供冲洗后的毛囊单位，于皮脂腺下缘1～2mm处剪断毛囊，取所述毛囊的下部，并使所述毛囊的真皮组织和表皮组织分开；

S12、对所述表皮组织进行消化处理，然后通过HGMCs细胞标志物标记和流式细胞分选，获得纯化的HGMCs单细胞悬液；

S13、对所述真皮组织进行消化处理，分离出DSCs单细胞悬液与DPCs单细胞悬液；

其中，步骤S12和步骤S13可同时进行。

3.根据权利要求2所述的仿生三维DPCs独立共培养体系的构建方法，其特征在于，步骤S11中，采用0.1％中性蛋白酶对所述毛囊的下部进行消化处理，使所述毛囊的真皮组织和表皮组织分开。

4.根据权利要求2所述的仿生三维DPCs独立共培养体系的构建方法，其特征在于，步骤S12中采用0.25％胰酶对所述表皮组织进行消化处理。

5.根据权利要求2所述的仿生三维DPCs独立共培养体系的构建方法，其特征在于，步骤S13中采用由0.1％中性蛋白酶和0.2％胶原酶组成的混合酶对所述真皮组织进行消化处理。

6.根据权利要求1所述的仿生三维DPCs独立共培养体系的构建方法，其特征在于，步骤S20具体包括以下步骤：

S21、提供Matrigel，将所述Matrigel从-20℃冰箱中取出，置于4℃冰箱中过夜，使Matrigel从固态融化为液态后备用；

S22、将DPCs单细胞悬液沉淀处理后置于冰上预冷，然后加入步骤S21所述的液态Matrigel，经吹打重悬，形成Matrigel-DP细胞混悬液。

7.根据权利要求1所述的仿生三维DPCs独立共培养体系的构建方法，其特征在于，S30具体包括以下步骤：

S31、采用预冷枪头的微量移液枪吸取Matrigel-DP细胞混悬液滴于Transwell小室的微孔膜的底部，使Matrigel-DP细胞液滴粘附于所述微孔膜；

S32、将粘附有所述Matrigel-DP细胞液滴的Transwell小室置于置于37℃孵箱中孵育，使Matrigel复温后成胶，形成三维半球型Matrigel-DP细胞胶滴，即三维DPCs培养体系。

8.根据权利要求1所述的仿生三维DPCs独立共培养体系的构建方法，其特征在于，步骤S40具体为：在所述三维DPCs培养体系的Transwell小室的上室的微孔膜的上表面接种HGMCs，同时在所述三维DPCs培养体系的Transwell小室的下室的底板上接种DSCs，然后加入培养基，制得仿生三维DPCs独立共培养体系。

9.根据权利要求1至8任一项所述的仿生三维DPCs独立共培养体系的构建方法，其特征在于，加入培养基是指：在所述仿生三维DPCs独立共培养体系的Transwell小室的上室中加入角质细胞培养基，在所述仿生三维DPCs独立共培养体系的Transwell小室的下室中加入20％-DMEM的完全培养基，然后置于37℃孵箱中培养。

10.一种仿生三维DPCs独立共培养体系，其特征在于，采用权利要求1至9任一项所述的构建方法制得。