[发明专利]利用两步盐析萃取分离纯化噬菌体裂解液中噬菌体的方法

说明书

本发明属于生物工程技术领域，提供了一种利用两步盐析萃取分离纯化噬菌体裂解液中噬菌体的方法。该方法为：将柠檬酸钠或磷酸氢二钾溶解于噬菌体裂解液中，加入乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂，温和涡旋混合，分相形成上、中、下三相的三相体系，完成第一步盐析萃取；向第一步盐析萃取所得下相溶液中加入正丙醇等亲水性有机溶剂，进行第二步盐析萃取，噬菌体在中间相得到富集和纯化。本发明解决了目前噬菌体分离工艺中存在的噬菌体与细菌代谢物难以分离、成本高等问题。该方法工艺简单、分离时间短、回收率高、分离成本低、除杂率高，是一种很有工业应用前景的分离方法。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种利用盐析萃取技术分离纯化噬菌体裂解液中 噬菌体的方法。

背景技术

21世纪以来，抗生素滥用引发的细菌耐药问题已成为全球性的公共卫生危机，新型抗 生素的研发困境也导致临床上的抗菌治疗形势日趋严峻。据2016年英国政府报告称，预计 至2050年，每年“超级细菌”导致的死亡人数将增至1000万人。抗生素危机使得多重耐药 菌和泛耐药菌感染疾病的治疗正面临着无药可用的严峻形势，也使得开发一种强有力的、 具有适应症人群大、临床效果显著、不同于现有的独特杀菌机制、成本低、易于保存和使 用等特点的抗菌治疗手段成为当务之急。

噬菌体因其巨大的抗菌潜力将有望成为治疗耐药细菌感染类疾病的抗生素替代品。烈 性噬菌体可以特异性识别宿主细菌，短时间内指数增殖并裂解宿主细菌，释放大量子代噬 菌体并杀死细菌。另外，噬菌体拥有与抗生素完全不同的抗性机制，因此两者不存在交叉 耐药性。美国食品与药物管理局(FDA)2016年和2019年先后批准了人体外用和静脉给药 的噬菌体疗法临床试验，标志着世界最大医药市场的监管路径已经对噬菌体疗法开放。

工业上噬菌体的制备包括宿主培养、噬菌体感染宿主和噬菌体分离纯化三大步骤。作 为一种高价值生物产品，噬菌体下游的分离纯化非常关键。但是噬菌体粗裂解液中的成分 非常复杂，主要含有宿主细胞、细胞碎片、杂蛋白、核酸、多糖和内毒素(LPS)等杂质， 而应用于治疗的噬菌体必须保持较高的效价和活性，但一般噬菌体的效价都较低，所以在 噬菌体的大规模浓缩处理和分离纯化过程中所面临的是极为复杂的工程化难题。