[发明专利]芽孢杆菌生防菌株及其应用

说明书

本发明公开了一种芽孢杆菌生防菌株及其应用。该菌株的分类命名为Bacillus sp.QJK‑3，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2019377。本发明通过实验表明：芽孢杆菌(Bacillus sp.QJK‑3)对青钱柳叶黑枯病具有良好的生防作用，防治效果可达69.1％。本发明为青钱柳叶黑枯病的生物防治奠定了基础，可以减少化学农药对环境生态和人类健康造成的危害，对青钱柳人工栽培和增收增产能够起到提高和促进作用。

技术领域

本发明涉及生物技术的微生物领域，具体涉及一种高效防治青钱柳叶黑枯病的芽孢杆菌(Bacillus sp.)QJK-3及其应用。

背景技术

青钱柳(Cyclocarya paliurus(Bata1.)Iljinskaja)是我国独有的胡桃科(Juglaruiaceae)青钱柳属(Cyclocarya)的单属种乔木，主要分布于我国南方海拔420–2500米的山区，属于濒危珍稀植物，具较高的药用、材用和观赏价值。其叶具独特甜味，当地居民有制作茶叶饮用的习俗，俗称“甜茶树”。青钱柳含有包括多糖、三萜、皂甙、黄酮类在内的等多种药理成分，具有降血糖、降血压、降血脂、抗氧化、消炎等多种生物学活性，尤其对糖尿病有显著的辅助疗效。

市场对青钱柳原材料和产品需求旺盛，囿于天然资源匮乏，近来开始了青钱柳的人工繁育。叶黑枯病是青钱柳栽培苗的一种重要病害，由杜仲拟茎点霉(Phomopsiseucommiae)引起，主要为害叶片，有时为害枝条。病斑初为暗褐色或黑色小点，后扩大成近圆形或不规则形，灰黑色，病健交界处不明显，后期病斑扩展连接，覆盖整叶，整株呈灰色至黑色，严重时可致植株死亡。目前应用化学杀菌剂仍然是防治青钱柳叶黑枯病的有效手段。然而化学杀菌剂的缺陷显而易见：高残留，易产生抗药性，危害非靶标生物，造成环境污染和生态危害，不利于绿色环保无公害作物种植和农业的可持续发展，因此有必要寻求一种安全、有效的防治青钱柳叶黑枯病的替代措施。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供芽孢杆菌生防菌株及其应用，该芽孢杆菌对青钱柳叶黑枯病菌有较强的拮抗作用，抑菌率可达72.2％，防治效果可达69.1％。

本发明的芽孢杆菌生防菌株，该菌株的分类命名为Bacillus sp.QJK-3，保藏于中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，保藏地址为中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCM2019377，保藏日期为2019年5月20日。

本发明的芽孢杆菌(Bacillus sp.QJK-3)是从青钱柳根际土壤中分离、采用平板对峙法筛选得到，经菌落形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列测定以及系统进化树分析，鉴定为芽孢杆菌。

本发明的芽孢杆菌(Bacillus sp.QJK-3)菌落向周围无规则凹凸生长，边缘不平滑，呈波纹状，表面有褶皱纹路，不透明的淡黄色。

本发明的芽孢杆菌(Bacillus sp.QJK-3)的生理生化特征：革兰氏染色、氧化酶、接触酶、脲酶和硝酸盐还原试验阳性；酯酶试验、甲基红试验、V-P试验和吲哚产生试验为阴性，不产生H₂S；对D-葡萄糖、D-棉籽糖和甘油能很好的利用，不能利用D-木糖、肌醇、L-鼠李糖、L-树胶醛糖、D-半乳糖和α-乳糖，能利用无机氮源、L-酪氨酸和DL-a-丙氨酸；能液化明胶、使牛奶胨化、水解酪素、利用柠檬酸盐，不能水解淀粉和纤维素。

本发明的芽孢杆菌(Bacillus sp.QJK-3)经16S rDNA序列比对(EzBioCloud数据库)与贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis CR-502T)、暹罗芽胞杆菌(B.siamensis KCTC13613T)、枯草芽孢杆菌枯草亚种(B.subtilis subsp.subtilis NCIB 3610T)以及解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens DSM 7T)等多个模式菌株的序列相似性≥97％。