[发明专利]烟草中一种甾醇类化合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.烟草中一种甾醇类化合物，其特征在于，结构式如式（I）所示：

，式（I）。

2.权利要求1所述的烟草中一种甾醇类化合物的制备方法，其特征在于，以云南地方晾晒烟为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析和高压液相色谱分离纯化步骤制得，具体包括如下步骤：

A、浸膏提取：将云南地方晾晒烟粉碎过筛，用云南地方晾晒烟重量3~10倍的有机溶剂Ⅰ超声提取3~5次，每次30~60 min，合并提取液浓缩得到浸膏a；所述的有机溶剂Ⅰ为体积百分浓度60~90%的丙酮、80~100%的乙醇或80~100%的甲醇；

B、硅胶柱层析：浸膏a用浸膏a重量2~8倍量的160~300目硅胶干法装柱进行硅胶柱层析，依次以体积配比为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1和1:2的氯仿和丙酮混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度洗脱至没有成分洗下后换下一梯度，收集梯度洗脱液，合并相同的部分并浓缩；

C、高压液相色谱分离：将B步骤采用9:1氯仿和丙酮混合溶剂进行洗脱得到的洗脱液经反相C₁₈制备液相色谱分离纯化，得到式（I）所示化合物粗品；

反相C₁₈制备色谱分离纯化是以21.2mm×250 mm、5μm的C₁₈色谱柱为固定相，以体积浓度为70%的甲醇为流动相，流速为20mL/min，紫外检测器检测波长为220nm，每次进样500μL，收集36.7min的色谱峰，多次累加后蒸干，得到式（I）所示化合物粗品。

3.根据权利要求2所述的烟草中一种甾醇类化合物的制备方法，其特征在于，A步骤中所述的粉碎过筛是粉碎后过30~50目筛，取筛下物。

4.根据权利要求2所述的烟草中一种甾醇类化合物的制备方法，其特征在于，浸膏a在经硅胶柱层析前，用浸膏a重量比1.5~3倍的有机溶剂Ⅱ溶解，然后用浸膏a重量0.8~1.5倍的80~100目硅胶拌样；所述的有机溶剂Ⅱ为纯甲醇、纯乙醇或纯丙酮。

5.根据权利要求2所述的烟草中一种甾醇类化合物的制备方法，其特征在于，制备色谱分离纯化后的全部化合物粗品再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用葡萄糖凝胶Sephadex LH-20柱层析分离，收集式（I）所示化合物的流出部分，得到式（I）所示化合物纯品。

6.权利要求1所述的烟草中一种甾醇类化合物在制备疫霉菌抑菌剂中的应用。

7.权利要求1所述的烟草中一种甾醇类化合物在制备抗烟草黑茎病生物农药中的应用。