[发明专利]血浆DNA文库及其构建方法在审
| 申请号： | 201910810742.3 | 申请日： | 2019-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN110468180A | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 王建伟;孙广欣;王冬;伍启熹;张静波;石露;王伟伟;刘倩;唐宇 | 申请（专利权）人： | 北京优迅医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C40B50/06 |
| 代理公司： | 11240 北京康信知识产权代理有限责任公司 | 代理人： | 路秀丽<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 100195 北京市海淀区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 血浆 血浆DNA 构建 文库 接头连接 连接产物 末端修复 建库 乳化 修复 乳化预处理 文库构建 整体实验 游离DNA 乳化剂 省略 | ||
1.一种血浆DNA文库的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：
向所述血浆中加入乳化剂，得到乳化血浆；
对所述乳化血浆进行末端修复加“A”，得到修复血浆；
对所述修复血浆进行接头连接，得到连接产物；
对所述连接产物进行PCR扩增，得到所述血浆DNA文库。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述血浆的用量为45～195μL，优选为50～180μL，更优选为100～150μL；
所述乳化剂选自Tween 20、Triton-100或NP40；优选地，所述乳化剂为Tween 20，更优选所述Tween 20在所述乳化血浆中的体积浓度为0.5％～10％，进一步优选为2％。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，采用同时具有末端修复和加“A”功能的Taq酶对所述乳化血浆进行末端修复加“A”，得到所述修复血浆；
优选地，所述同时具有末端修复和加“A”功能的Taq酶选自LA Taq或rTaq。
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述末端修复加“A”的反应温度为50℃～75℃，优选为60℃～68℃；更优选为65℃。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的构建方法，其特征在于，在对所述连接产物进行PCR扩增之前，所述构建方法还包括对所述连接产物进行纯化。
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，对所述连接产物进行纯化包括：
对所述连接产物中的蛋白进行降解处理，得到第一纯化产物；
对所述第一纯化产物进行磁珠纯化，得到第二纯化产物，所述第二纯化产物即为纯化后的所述连接产物。
7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，采用蛋白降解剂对所述连接产物中的蛋白进行所述降解处理，得到所述第一纯化产物；
优选地，所述蛋白降解剂选自SDS和/或蛋白酶K；
更优选地，以质量体积浓度计，所述SDS在所述降解处理中的终浓度为0.5％～3％；
更优选地，所述蛋白酶K在所述降解处理中的终浓度为1mg/mL～4mg/mL。
8.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述降解处理的温度为25℃～75℃，优选为45～65℃；
优选地，所述降解处理在震荡条件下进行，所述震荡的转速为600～1000rpm/min，更优选为750～850rpm/min；
优选地，所述降解处理的时间为5～20min。
9.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，采用0.6～0.8倍所述第一纯化产物体积的Ampure XP磁珠对所述第一纯化产物进行纯化，得到所述第二纯化产物。
10.一种血浆DNA文库，其特征在于，所述血浆DNA文库通过权利要求1至9中任一项所述的构建方法构建而成。
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