[发明专利]一种鸡“鹿角”冠相关的分子标记及其分型方法和应用

权利要求书

1.利用鸡“鹿角”冠相关的分子标记在鸡“鹿角”冠基因型选淘中的应用，其特征在于，所述分子标记为SEQ.No.4所示和/或SEQ.No.5所示的基因序列，变异位点为基因序列的第44位核苷酸，野生型等位基因序列如SEQ.No.4所示；突变基因序列如SEQ.No.5所示。

2.根据权利要求1所述的分子标记在鸡“鹿角”冠基因型选淘中的应用，其特征在于，所述的“鹿角”冠基因型选淘方法是通过抽提样本血液DNA样本后对其进行多重PCR扩增，PCR产物纯化后进行延伸反应，将产物进行测序对变异位点进行分型，然后淘汰杂合子个体。

3.根据权利要求1所述的分子标记在鸡“鹿角”冠基因型选淘中的应用，其特征在于，所述的“鹿角”冠基因型选淘方法具体包括如下步骤：

步骤1 淘汰纯种河田鸡的杂合子个体：通过对变异位点的核苷酸检测，剔除纯种河田鸡群体中的AG型个体，选留GG型个体；

步骤2 用其它快大型单冠品系公鸡和纯种河田鸡母鸡杂交:选择60只符合要求的优秀其它快大型单冠品系公鸡与600只经分子标记辅助选择过的纯种河田鸡母鸡杂交，生产F1代；

步骤3 F1个体横交得到F2代:产蛋高峰期，选择符合要求F1的公母鸡个体进行横交，得到F2代个体；

步骤4 淘汰F2代的杂合子个体:通过对变异位点的核苷酸检测，剔除F2代群体中的AG型个体，选留GG型个体;

步骤5 横交得到具有鹿角冠性状的新品系:将步骤4经过分子标记选择的F2代个体，进行自交，得到性状遗传稳定的具有鹿角冠性状的新品系。

4.根据权利要求2所述的分子标记在鸡“鹿角”冠基因型选淘中的应用，其特征在于，其具体包括如下步骤：

步骤1：样本DNA抽提：根据采用苯酚-氯仿抽提法提取样本血液DNA；

步骤2：目的位点分型：

（1）多重PCR扩增：正向引物和反向引物混合得到混合引物；向其中加入样本血液DNA、核苷酸后用水定容配制PCR体系，按照95℃ 3min；94℃ 15s，55℃ 15s，35循环；72℃ 30s；72℃ 3min的扩增条件进行扩增反应，得到PCR产物；

（2）PCR产物纯化：使用ExoI，FastAP和ExoI buffer对PCR产物进行纯化；

（3）延伸反应：将纯化后的PCR产物加入Snapshot Mix 试剂、延伸引物并用水定容，按照96℃ 1min；96℃10s，52℃ 5s，30循环；60℃ 30s的扩增条件进行延伸反应，得到延伸产物；

（4）测序分型：将延伸产物变性后上测序仪测序，根据目的位点的核苷酸淘汰杂合子个体。