[发明专利]流感病毒PB1蛋白突变体及其编码基因与应用

说明书

本发明公开了流感病毒PB1蛋白突变体及其编码基因与应用。本发明提供了一种流感病毒聚合酶突变体，为将流感病毒聚合酶氨基酸序列第201位苏氨酸T突变为谷氨酸E或丙氨酸A，且其他氨基酸残基不变得到的蛋白。本发明首次发现A型流感病毒中PB1上的关键的功能性氨基酸位点，首次提出A型流感病毒PB1上第201位氨基酸是影响病毒聚合酶活性的功能位点，可作为药物靶点(抗原肽的靶点)。本发明还将PB1该位点上第201位氨基酸突变为E或A，收获的病毒致病力降低，且可以持续复制，可以作为流感病毒疫苗株。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及流感病毒PB1蛋白突变体及其编码基因与应用。

背景技术

流感病毒会造成急性上呼吸道感染，借由空气迅速的传播。A型流感病毒发生频繁，宿主谱非常广泛，能感染人、禽、猪、马、海洋哺乳动物等，历史上有多次因A型H1N1流感病毒导致的大流行，造成了大量人和动物的感染及死亡。例如2009年由A型H1N1病毒引起的流感流行。

A型流感病毒基因组由8股负链RNA节段构成，病毒结构的核心成分是病毒核糖核蛋白体(vRNP)复合物，主要由聚合酶蛋白(PB1、PB2、PA)、vRNA和核蛋白(NP)构成，决定着病毒RNA能否在宿主细胞内进行良好的转录和复制。

A型流感病毒PB1由流感病毒基因组第2节段RNA编码，由病毒聚合酶PB1、PB2和PA亚基组成的异源三聚体大约250kDa，组成了RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNApolymerase，RdRp)，参与病毒RNA转录和复制。

流感病毒高度变异性的特点使得当前的流感疫苗无法有效的实现预防保护作用，靶向药物是目前用于临床治疗最先进的药物，任何一种疾病都有其相关的至少一个靶点。流感病毒新药研究与开发的关键是寻找、筛选和确定药物靶点。众所周知的抗流感药物之一奥司他韦，其药物作用靶标是病毒表面神经氨酸酶(NA)。香港大学医学院发现的小化合物药物Nucleozin，能靶向聚集流感病毒NP，令其失去功能，阻止NP进入细胞核，从而抑制病毒复制。

巴洛沙韦(Baloxavir)是一种抗流感化合物，其有效且选择性地抑制A型和B型流感病毒的聚合酶PA亚基的cap-dependent核酸内切酶功能，用于A型和B型流感的治疗。

较理想的方案是，找到病毒蛋白上高度保守的，表面结构独特的，功能性位点，将其作为药物靶点，设计化合物或抗原肽，阻抗病毒功能。

PB1：碱性聚合酶蛋白1，Polymerase basic protein 1，也称Polymerase 1。

发明内容

为了有效治疗流感病毒，本发明提供了如下技术方案：

本发明的一个目的是提供一种流感病毒聚合酶突变体，为将流感病毒聚合酶PB1氨基酸序列第201位苏氨酸T突变为谷氨酸E或丙氨酸A，且其他氨基酸残基不变得到的蛋白。

上述突变体中，所述流感病毒聚合酶源于A型流感病毒。

上述突变体中，所述流感病毒聚合酶PB1的氨基酸序列为序列表中序列1。

编码上述的突变体的核苷酸也是本发明保护的范围；

或含有所述核苷酸的重组载体也是本发明保护的范围。

上述突变体或上述核苷酸或重组载体在如下1)或2)或3)中的应用也是本发明保护的范围：

1)制备病毒致病力降低的流感病毒的产品；

2)制备病毒聚合酶活性降低的流感病毒的产品；

3)制备预防或治疗流感病毒感染疾病的产品。

本发明另一个目的是提供如下物质：