[发明专利]xCas9n-epBE碱基编辑系统在基因编辑中的应用

权利要求书

1.基因组靶点序列的编辑方法，为方法（一）或方法（二）或方法（三）或方法（四）：

所述方法（一）包括如下步骤：将xCas9n的编码基因、转录tRNA-esgRNA的DNA分子、PmCDA1的编码基因和UGI的编码基因导入植物或植物细胞内，使所述xCas9n、所述tRNA-esgRNA、所述PmCDA1和所述UGI的编码基因均得到表达，实现基因组靶点序列的编辑；

所述方法（二）包括如下步骤：将xCas9n的编码基因、转录tRNA-esgRNA的DNA分子和PmCDA1的编码基因导入植物体或植物细胞内，使所述xCas9n、所述tRNA-esgRNA和所述PmCDA1的编码基因均得到表达，实现基因组靶点序列的编辑；

所述方法（三）包括如下步骤：将xCas9n、tRNA-esgRNA、PmCDA1和UGI导入植物或植物细胞内，实现基因组靶点序列的编辑；

所述方法（四）包括如下步骤：将xCas9n、tRNA-esgRNA和PmCDA1导入植物或植物细胞内，实现基因组靶点序列的编辑；

所述tRNA-esgRNA靶向所述靶点序列；

所述tRNA-esgRNA如式I所示：tRNA-所述靶点序列转录的RNA-esgRNA骨架（式I）；

所述tRNA为将序列1第474-550位中的T替换为U得到的RNA分子；

所述esgRNA骨架为将序列1第571-656位中的T替换为U得到的RNA分子；

所述靶点序列的PAM序列为如下任一种：TGT、GGT、GAA、GAT；

所述xCas9n为氨基酸序列是序列2所示的蛋白质；

所述PmCDA1为氨基酸序列是序列3所示的蛋白质；

所述UGI为氨基酸序列是序列4所示的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述xCas9n的编码基因为序列1第2857-7125位所示的DNA分子。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述PmCDA1的编码基因为序列1第7417-8040位所示的DNA分子。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述UGI的编码基因为序列1第8062-8358位所示的DNA分子。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述基因组靶点序列的编辑为将所述靶点序列中的C突变为T。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述植物为p1）或p2）或p3）：

p1）单子叶植物或双子叶植物；

p2）禾本科植物；

p3）水稻；

所述植物细胞为q1）或q2）或q3）：

q1）单子叶植物细胞或双子叶植物细胞；

q2）禾本科植物细胞；

q3）水稻细胞。

7.植物突变体的制备方法，包括如下步骤：按照权利要求1-6任一所述的方法对植物的基因组靶点序列进行编辑，获得植物突变体。