[发明专利]一种方格星虫胶原肽在创伤修复中的应用

权利要求书

1.一种方格星虫胶原肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述方格星虫胶原肽具有修复皮肤创伤的新用途；

所述方格星虫胶原肽的制备方法包括以下步骤：

S1.提取方格星虫胶原蛋白；将新鲜虫体剪碎后，按照加入原料质量4-5倍0.2M NaOH，在4℃下搅拌12-24小时，离心去上清；沉淀用蒸馏水洗净沥干后，加入质量4-5倍的0.5M乙酸溶液和0.05-0.20％胃蛋白酶（w/v），在4℃下提取24-60小时后，离心取上清液，缓慢加入NaCl至1M，搅拌12-24h、离心、收集沉淀物、0.5M乙酸溶解、透析、冻干，制得胶原蛋白；

S2.酶解制备方格星虫胶原肽。

2.根据权利要求1所述的方格星虫胶原肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述S2中，酶解的具体方法包括：选用中性蛋白酶、动物蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的任两种酶复配，两种酶的添加量均为3000-5000U/g，pH值5.0-7.0，酶解温度45-55℃，酶解时间3-5小时，100℃灭酶10分钟后，离心取上清液，冷冻干燥得到方格星虫胶原肽。

3.根据权利要求1所述的方格星虫胶原肽在创伤修复中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；

（2）对创伤模型的小鼠进行给药；

（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、组织病理学分析中的任一种或几种的组合。

4.根据权利要求3所述的方格星虫胶原肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述步骤（2）中，给药的方式为：取方格星虫胶原肽5-60mg总氮含量/ml水涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组，连续给药28天。

5.云南白药阳性对照组，

根据权利要求3所述的方格星虫胶原肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述步骤（2）中，给药的方式为：按照0.15-0.45g/kg·bw的给药量，采用方格星虫胶原肽对小鼠进行灌胃，每天灌胃给药一次，灌胃量为0.1mL/10g·bw，采用无菌生理盐水为阴性对照组，连续给药28天。

6.根据权利要求4或5所述的方格星虫胶原肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法为：所述步骤（2）中涂抹给药后，从第0天开始，每2天在同一固定高度拍照记录伤口创面情况，用软件计算伤口愈合率、记录掉痂时间；伤口愈合率测定的公式（2）为：

，

公式中n是造模后天数。

7.根据权利要求4或5所述的方格星虫胶原肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述步骤（3）中，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1 mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。

8.根据权利要求1所述的方格星虫胶原肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述方格星虫胶原肽可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。