[发明专利]一种诊疗磁性细菌及其制备方法

权利要求书

1.一种纳米荧光探针标记趋磁细菌的方法，所述方法包括将纳米荧光探针（INPs）表面的马来酰亚胺基团与经还原剂处理后的趋磁细菌表面的巯基化学交联，所述INPs包括亲水性外壳、中间层和疏水性内壳，所述亲水性外壳含有两性化合物，所述两性化合物含有马来酰亚胺基团，所述中间层含有单层脂类分子，所述疏水性内壳含有近红外光热转换试剂和疏水性多聚物；所述两性化合物穿插于所述中间层形成疏水性外壳；所述近红外光热转换试剂吸附在疏水性多聚物上，形成疏水性内壳；所述两性化合物为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰胺（DSPE-PEG-Mal）；所述单层脂类分子为大豆卵磷脂；所述近红外光热转换试剂为吲哚菁绿（ICG）；所述疏水性多聚物为聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）；

所述趋磁细菌为AMB-1菌株；所述还原剂为三(2-羧乙基)膦（TCEP）；

所述INPs的制备方法包括如下步骤：

（1）将大豆卵磷脂乙醇溶液和DSPE-PEG-Mal乙醇溶液以2：3的质量比混合，大豆卵磷脂和DSPE-PEG-Mal总重量为PLGA总重量的15%；

（2）ICG 4%乙醇溶液加入2 mL 4%乙醇溶液中；

（3）将步骤（1）和（2）溶液混合，得到混合液，用超声破碎仪超声分散所述混合液5分钟；

（4）在步骤（3）所述超声过程中，将PLGA丙酮溶液逐滴滴入所述混合溶液中，形成纳米探针分散液；

（5）将步骤（4）所述纳米探针分散液转移到3500 KDa的透析袋中透析浓缩，得到纯化的INPs。

2.根据权利要求1所述的方法，所述INPs还包括化疗药物，所述化疗药物吸附于所述两性化合物的脂端及单层脂类分子上，所述化疗药物包括阿霉素、表阿霉素、紫杉醇、去甲长春花碱、铂类药物中任一一种或多种。

3.一种制备诊疗磁性细菌的方法，包括如下步骤：

（1）根据权利要求1所述方法制备INPs；

（2）将密度为10⁷-10⁸ CFU/mL的趋磁细菌收集在离心管中，在3500 rpm重力下离心；

（3）将趋磁细菌重悬于20-30 mM 三(2-羧乙基)膦的PBS溶液中，在37℃下孵育20-120分钟；

（4）用PBS洗涤细菌两次；

（5）将1 mL步骤（1）制备的INPs加入到步骤（4）所得的趋磁细菌中，在37℃下孵育20-120分钟；

（6）离心洗涤，即得纳米荧光探针标记的诊疗磁性细菌。

4.根据权利要求1或2所述的方法制备的纳米荧光探针标记的趋磁细菌或权利要求3所述的方法制备的诊疗磁性细菌。

5.根据权利要求1或2所述的方法制备的纳米荧光探针标记的趋磁细菌或权利要求3所述的方法制备的诊疗磁性细菌在制备筛选治疗和/或预防肿瘤药物中的应用。