[发明专利]抑制MCM7的siRNA、组合物及其应用

说明书

本发明公开了一种抑制MCM7的siRNA、组合物及其应用，本发明设计及验证的siRNA能高效抑制MCM7基因表达，从而抑制癌症细胞的DNA合成、细胞增殖和细胞克隆的生成，起到预防和治疗肿瘤的目的。本发明为癌症预防或治疗提供了一种新的靶点和候选药物。

技术领域

本发明属于生物医药领域，特别涉及抑制MCM7的siRNA、组合物及其应用。

背景技术

MCM复合体由MCM2～MCM7亚基组成，在细胞内具有解旋酶活性，在DNA复制前打开DNA双链，参与到DNA复制起始(Bik Tye,Annual Review of Biochemistry,1999)。而且MCM复合体还对细胞增殖、DNA损伤修复和细胞周期起到重要的调控作用。

小干扰RNA(Small interfering RNA，siRNA)是一种长20～25个核苷酸的双链RNA，最早在植物的转录后基因沉默现象中发现，公开报道了人工合成的siRNA可沉默哺乳动物细胞的特定基因表达(Thomas Tuschl et al.,Nature,2001；Thomas Tuschl et al.,Science,2001；Thomas Tuschl et al.,Cell,2002)。由于siRNA可以在基因水平靶向干扰，不需要依赖靶点蛋白的晶体结构。因此科学家们研究了一系列利用siRNA进行RNA干扰(RNAinterference，RNAi)来抑制靶标基因的表达的方法，从而进行基因功能研究与疾病治疗。

由于靶标基因上的不同位点的序列不同而具有不同的二级结构和不同的热动力学特性，因此，不同位点被siRNA干扰的可能性和程度会有很大差异。另外，相同siRNA在不同种类的细胞中的活性也可能不同。因此，对于任何一个细胞中的任何靶标基因，高活性siRNA的设计、测试和获得是一个创造性发明的过程。

目前，尚未见有关用于抑制肝癌、胃癌、前列腺癌等癌细胞的MCM7基因的siRNA的报道。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种抑制MCM7的siRNA。

本发明的另一目的在于提供上述siRNA的应用。

本发明的再一目的在于提供一种siRNA特异性靶向MCM7基因而预防或治疗肿瘤/癌症的方法。

发明人针对MCM7基因设计和测试了许多RNA干扰片段，但是大部分siRNAs的干扰效率低，无法有效进行后期肿瘤治疗研究。发明人经过探索研究，创造性发明了一些高效的siRNA序列，用于干扰MCM7基因。这对于RNA干扰的应用至关重要，即靶基因不同位点的siRNA作用效果差异很大，可能与siRNA二级(元)结构和热动力学性质、碱基分布等因素有关。

发明人进一步探索发现，通过改变siRNA正义链的一个或多个碱基，使得正义链和反义链构成不完全互补配对，因此改变整个双链RNA热动力学性质，提高反义链进入RNA干扰复合体蛋白的效率，从而提高了siRNA抑制靶标MCM7基因的效率。

为达到上述目的，本发明所采取的技术方案是：

发明人以MCM7蛋白为靶点设计了siRNA。该siRNA通过抑制人MCM7基因的表达从而抑制MCM7蛋白的合成，从而阻扰了整个MCM复合体(MCM2-MCM7)的形成，从而抑制DNA复制和细胞增殖来达到肿瘤/癌症预防或治疗的目的。

通过siRNA对MCM复合体任何一个亚基的表达抑制，可以抑制整个复合体的形成，进而抑制细胞增殖产生抗肿瘤作用。

本发明一个方面，提出了siRNA，所述siRNA可抑制MCM7基因表达，由正义链和反义链组成，其中，所述siRNA选自：

siRNA-1：正义链：5'-GGACUUAAUUUGUGAGAAU-3'；

反义链：5'-AUUCUCACAAAUUGAGUCC-3'；