[发明专利]一种分离提取5-十五烷基间苯二酚的方法

说明书

本发明公开了一种分离提取5‑十五烷基间苯二酚的方法，包括：黑曲霉经麦麸发酵收集孢子粉后经喷雾干燥制成菌粉备用，质量比为1:5的菌粉与丙酮，在一个标准大气压下、温度为40‑60℃下回流提取3次，每次3h，得黑曲霉孢子粉提取液，减压浓缩、石油醚萃取，再经减压浓缩至石油醚挥干，得粗提物；硅胶柱层析；再次硅胶柱层析；Sephadex LH‑20凝胶柱层析，通过薄层色谱层析情况选取在石油醚:乙酸乙酯=8:1展开条件下Rf值在0.3‑0.5的流分，在石油醚:乙酸乙酯=1:50混合溶剂中重结晶得到的单体物质即为5‑十五烷基间苯二酚。本发明底物廉价易得，提取工艺简单、易行，生产过程环保、溶剂残留少、污染低、培养基质容易获得。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体来说涉及一种分离提取5-十五烷基间苯二酚的方法。

背景技术

5-十五烷基间苯二酚（5-n-Pentadecylresorcinol)，是1,3-间苯二酚苯环5位被长链烷基取代的一类酚类类脂，烷基间苯二酚不仅具有抗菌、抗突变、抗癌、抗寄生虫、抗氧化，还具有抑制多种糖脂相关酶的活性。目前对5-十五烷基间苯二酚的制备方法还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种底物廉价易得，提取工艺简单、易行，生产过程环保、溶剂残留少、污染低、培养基质容易获得的分离提取5-十五烷基间苯二酚的方法。

本发明目的及解决其主要技术问题是采用以下技术方案来实现的：

本发明的一种分离提取5-十五烷基间苯二酚的方法，包括以下步骤：

（1）粗提物的制备

黑曲霉经麦麸发酵收集孢子粉后经喷雾干燥制成菌粉备用，质量比为1:5的菌粉与丙酮，在一个标准大气压下、温度为40-60℃下回流提取3次，每次3h，得黑曲霉孢子粉提取液，减压浓缩至总体积的1/10-1/5后加等体积的水溶解，水溶液与等体积的石油醚萃取得石油醚萃取液，再经减压浓缩至石油醚挥干，得粗提物；

（2）硅胶柱层析

将粗提物用等体积乙酸乙酯溶解后，用40～80目硅胶按体积比为1:1.2拌样，同时水浴挥干乙酸乙酯后，上样在已制备好的200～300目硅胶层析柱上进行常压硅胶柱洗脱；洗脱梯度为100%石油醚，石油醚:丙酮=100:1、50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1，100%丙酮等比例洗脱，流速为10～20ml/min，通过薄层层析色谱分析，观察5%的浓硫酸乙醇溶液和0.8%磷钼酸乙醇溶液的显色情况,选取物质成点情况和Rf值相同的流分合并，减压浓缩至有机溶剂挥干，得不同浓缩液；

（3）再次硅胶柱层析

收集石油醚:丙酮=10:1-5:1体系的洗脱液，减压浓缩至有机溶剂挥干，用乙酸乙酯溶解浓缩液后与40目硅胶按体积比为1:1.2拌样，同时水浴挥干混合溶剂后上样在已制备好的硅胶层析柱上进行常压硅胶柱洗脱；流速为20-25ml/min，洗脱体系为石油醚:乙酸乙酯=10:1，通过薄层层析色谱分析，观察5%的浓硫酸乙醇溶液和0.8%磷钼酸乙醇溶液的显色情况，选取物质成点情况和Rf值相同的流分合并，减压浓缩至有机溶剂挥干，得不同浓缩组分；

（4）Sephadex LH-20凝胶柱层析

通过薄层色谱层析情况选取在石油醚:乙酸乙酯=8:1展开条件下Rf值在0.3-0.5的流分，用体积比为1:1氯仿与甲醇溶液溶解后进行Sephadex LH-20凝胶柱层析，并用体积比为1:1的氯仿与甲醇溶液进行洗脱，流速为10-20ml/min，分段收集、合并洗脱液，减压浓缩至有机溶剂挥干后；通过薄层色谱层析情况选取在石油醚:乙酸乙酯=8:1展开条件下Rf值在0.3-0.5的流分，在石油醚:乙酸乙酯=1:50混合溶剂中重结晶得到的单体物质即为5-十五烷基间苯二酚。