[发明专利]一种筛选最佳绿藻组合混合培养的方法

说明书

本发明公开了一种筛选最佳绿藻组合混合培养的方法。尤其是一种筛选羊角月牙藻（Selenastrumcapricornutum）和蛋白核小球藻（Chlorellapyrenoidosa）两种绿藻的最佳组合混合培养的方法。该方法根据两种藻自身的生物特性，通过模拟实验，在适当的条件下，选择合适的比例混合培养，从混合培养体系中筛选总细胞密度大、叶绿素a含量高、吸光值大、生物量大的绿藻组合为最佳组合。本发明培养方法生态环保，同时解决了绿藻在培养过程中通常会遇到的光能利用率差、细胞密度低、生物量少等问题，实现高效率培养绿藻高密度大规模培养产业化。

技术领域

本发明属于藻类生物技术领域，具体涉及一种筛选最佳绿藻组合混合培养的方法。该方法涉及到羊角月牙藻（Selenastrum capricornutum）和蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）两种藻。

背景技术

绿藻是一类种类繁多、分布广泛、营养丰富、细胞形态多样、光合利用度高的自养植物，细胞代谢产生的多糖、蛋白质、色素等，使其在食品、医药、基因工程、液体燃料等领域具有很好的开发前景。尤其在环境保护领域具有显著的作用，绿藻作为水生生态系统的初级生产者，对水体的平衡和稳定起着极其重要的作用，是反映水体环境质量的重要指标。羊角月牙藻（Selenastrum capricornutum）、蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）因其个体小、繁殖快、敏感度高等特点，是目前水生生态毒理学研究中生物毒性测试中常用的藻种。同时，污水中高浓度的氮和磷是绿藻生长的必要元素，利用绿藻处理城市生活污水，能降低污染物含量的同时收获含有绿藻单细胞的饲料，具有成本低、经济效应好等特点。

然而，现有技术中藻的培养主要是以单一藻种类培养模式为主，即使通过寻找合适藻生长繁殖的最佳条件如温度、光照、营养盐和培养方式等因素进行藻类培养，但仍然未能达到高密度的培养效果，这就直接影响继续扩繁成功率及使用效果；同时单一藻种培养不适于污水体系，污水体系里的杂藻、原生动物等能够降低单一藻种的生产效率甚至使培养系统崩溃。选择合适的绿藻进行混合培养能够达到预想的培养效果。目前关于微藻混合培养的研究多集中于水华微藻生长抑制，而关于获取高密度绿藻混合培养模式的研究鲜有报道。因此，提供一种易操作、实用性强、生态环保的多种藻种混合培养最佳组合筛选方法，实现高效率且高密度绿藻培养效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种筛选最佳绿藻组合混合培养的方法。使之能够实现高密度绿藻培养的效果。

具体步骤为：

（1）藻种纯培养：购买藻种，并准备好相对应的培养基；收到藻种后，在无菌操作下将5~10mL藻种直接转入250mL的锥形瓶中，并加入已配置好的新鲜培养基定容至100mL，封好瓶口，放置在光照培养箱内培养，每隔2~3d按1:1稀释转接藻种，接转至3代后作为试验用藻；每次接种时先在显微镜下观察藻种生长情况。

（2）藻种混合培养设计：两个藻种组合实验共设置3个处理组和2个对照组，并设置实验中的每个藻种处理3个平行，在两个藻种混合体系中，设定纯培养与混合培养的相同细胞初始总密度。

（3）藻种混合培养：选择步骤（1）得到的纯培养条件下处于对数生长期的两种试验用藻，并用血球计数法计算藻细胞浓度，用培养基稀释保证两种藻相同的初始接种藻细胞浓度，再按比例均匀混合培养。

（4）测定混合培养藻种相关指标：自接种日次日起为第一天，每次测定应在同一时间点，分别测定藻细胞密度、叶绿素a、吸光值和生物量4个指标。

（5）筛选最佳组合：依据步骤（4）测定的相关指标结果，并与对照组比较，筛选出藻细胞密度大、叶绿素a含量高、吸光值大、生物量大的为最佳组合。