[发明专利]一种胺脱氢酶及其应用

权利要求书

1.一种胺脱氢酶，其特征在于：对如SEQ ID NO. 01 所示的氨基酸脱氢酶进行突变而获得，上述突变为将第131位的G突变为L、将第131位的G突变为M、将第262位的N突变为V、第285位的Y突变为L、将第262位的N突变为L、将第285位的Y突变为M或将第262位的N突变为V叠加将第333位的M突变为D。

2.如权利要求1所述的一种胺脱氢酶，其特征在于：所述氨基酸脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO. 02所示。

3.如权利要求2所述的一种胺脱氢酶，其特征在于：所述突变通过PCR进行，其中，将第131位的G突变为L所用的引物为G131L-F和G131L-R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO. 03和04所示，将第131位的G突变为M所用的引物为G131M-F和G131M-R，其核苷酸序列分别如SEQID NO. 05和06所示。

4.如权利要求2所述的一种胺脱氢酶，其特征在于：所述突变通过PCR进行，其中将第262位的N突变为V所用的引物为N262V-F和N262V-R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO. 07和08所示，将第262位的N突变为L所用的引物为N262L-F和N262L-R，其核苷酸序列分别如SEQID NO. 09和10所示。

5.如权利要求2所述的一种胺脱氢酶，其特征在于：所述突变通过PCR进行，其中将第285位的Y突变为L所用的引物为Y285L-F和Y285L-R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO. 11和12所示，将第285位的Y突变为M所用的引物为Y285M-F和Y285 M-R，其核苷酸序列分别如SEQID NO. 13和14所示。

6.如权利要求2所述的一种胺脱氢酶，其特征在于：所述突变通过PCR进行，其中将第333位的M突变为D所用的引物为M333D-F和M333D-R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO. 15和16所示。

7.权利要求1至6中任一权利要求所述的一种胺脱氢酶在催化不对称还原胺化得到手性胺中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：构建反应体系，于10-60℃且100-300rpm的转速震荡反应10-90h，获得所述手性胺；

上述反应体系包括如下：

pH=8-12，0.001-0.05 mol/L酮，0.002-0.2mol/L氨基供体，0-0.2mol/L辅助底物，0.01-0.2 mol/L的缓冲液，5-300 mg/L的所述胺脱氢酶；

上述酮的结构式为，其中，R₁为是C2-10的烷基、芳香基或羟基，R₂为是C2-10的烷基、芳香基或羟基。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述氨基供体为丙氨酸、氨水、NH₄Cl和NH₄NO₃中的至少一种，所述缓冲液为Tris-盐酸缓冲液、乙酸钠缓冲液、碳酸钠缓冲液和磷酸钾缓冲液中的至少一种，所述辅助底物为NADH。