[发明专利]百药煎中2,4,6-三-O-没食子酰-D-葡萄糖在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

本发明提供了百药煎中2,4,6‑三‑O‑没食子酰‑D‑葡萄糖在制备抗肿瘤药物中的应用，属于微生物发酵技术领域。2,4,6‑三‑O‑没食子酰‑D‑葡萄糖有抗肿瘤活性，为开发新的抗肿瘤药提供了技术保障。

本发明是申请号为CN201611257588.4，发明名称为一种黑曲霉菌株及其发酵百药煎生成新成分的制备方法与应用，申请日为2016年12月30日的专利的分案申请

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，尤其涉及百药煎中2,4,6-三-O-没食子酰-D-葡萄糖在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

百药煎始载于《丹溪心法》，为五倍子同茶叶等经发酵制成的块状物。性味酸甘，平。具有润肺化痰，生津止渴的功效。临床多用于治疗久咳痰多，咽痛，便血，久痢脱肛，口疮，牙疳，痈肿疮疡。目前发酵百药煎多采用复合菌固态发酵，由于复合菌在发酵过程中菌种的变化不清楚，且固体发酵具有发酵过程参数难以测定、过程控制困难，菌体生长、发酵以及代谢产物在发酵体系中分布不均等不足，导致产品稳定性较差、重复性较低，给百药煎的发酵过程带来不便，使百药煎质量不稳定。五倍子发酵成为百药煎后鞣质含量减少，没食子酸含量升高，选育一株优势菌株并研究其在百药煎发酵中的应用，并将发酵后升高的化学成分提取分离，结构鉴定，并对该成分抗肿瘤活性进行研究，能更好的控制百药煎的质量，为百药煎临床用药提供依据，保证其临床用药安全有效。

发明内容

针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种黑曲霉菌株及其发酵百药煎生成新成分的制备方法与应用，可有效解决固体发酵具有发酵过程参数难以测定、过程控制困难，菌体生长、发酵以及代谢产物在发酵体系中分布不均等不足，导致产品稳定性较差、重复性较低，给百药煎的发酵过程带来不便，百药煎质量不稳定的问题。

本发明解决的技术方案是，本发明所述黑曲霉菌株，其分类命名为曲霉(Aspergillus sp.)BYJ.H-1，已于2016年7月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M2016376，保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，武汉大学保藏中心。

其制备方法为：收集新鲜百药煎，采用稀释涂布平板法，分别用孟加拉红、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)和酵母膏3种培养基，28℃恒温培养，共分离出2个属的6株菌种，通过发酵百药煎外观状态、液相分析，分离和筛选出使百药煎中没食子酸含量最高的黑曲霉BYJ.H-1；所述的百药煎是：将五倍子药材洗净，80℃干燥4h，粉碎，过80目筛，取茶叶粗粉1g于10-20mL沸水中煎煮15min，放至23-27℃，滤去茶渣，得茶汁，取茶渣、3mL茶汁与10g上述五倍子粉混匀，用润湿八层纱布封口于115℃灭菌30min，放凉，即得；

所述的孟加拉红培养基是由：蛋白胨5g、葡萄糖10g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.5g、琼脂20g、1/3000孟加拉红溶液100mL、蒸馏水1000mL和氯霉素0.1g制成；

所述的马铃薯葡萄糖琼脂培养基是由：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15-20g和自来水1000ml制成；

所述的酵母膏培养基是由：酵母膏5g、蔗糖10g、琼脂粉14g于1000ml蒸馏水中，煎煮至沸，补足体积即可。

黑曲霉菌株发酵百药煎生成新成分的制备方法，包括以下步骤：