[发明专利]一种食用油中4种多环芳烃化合物的快速提取净化方法及其检测应用

说明书

本发明公开了一种食用油中4种多环芳烃化合物的快速提取净化方法及其检测应用，特点是包括以下步骤：（1）称取待测食用油样品，依次加入提取液和脂肪酶，恒温震荡酶解后，加入碳酸钾和乙醇或碳酸钠和乙醇，涡旋混匀；（2）然后加入正己烷和水，震荡离心后，分离得到上层有机相和下层水相；（3）取下层水相按步骤（2）方法，重复萃取1次；合并两次萃取所得上层有机相部分，混匀，40℃旋蒸至干，用乙腈复溶，过滤膜待分析；其检测应用为按上述方法进行样品前处理，然后进行液相色谱‑荧光检测，根据4种PAHs的浓度与仪器响应值之间的定量关系，计算获得待测液中4种PAHs含量；优点是提取回收率高，简单快速、灵敏度和准确性高。

技术领域

本发明涉及一种食用油中4种多环芳烃的前处理以及检测方法，尤其是涉及一种食用油中4种多环芳烃化合物的快速提取净化方法及其检测应用。

背景技术

多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbons，PAHs)作为一类强致癌性化合物，主要来源于反复使用或高温油炸的食用油中，苯并[a]蒽(BaA)、苯并[b]荧蒽(BbF)、苯并[k]荧蒽(BkF)和苯并[a]芘(BaP)是毒性较强的4种PAHs，其中BaP被国际癌症研究机构归为1类致癌物，其余三种归为2B类致癌物。受暴利的驱使，非正常食用油越来越频繁的出现在人们的生活中，对人们的身体健康存着巨大的威胁，国家严厉打击此类食品违法行为。因此，建立能够快速同时测定食用油中4种PAHs含量的方法尤为重要。

尽管已有学者建立了食用油中单一或多个多环芳烃的快速筛查方法，但前处理过程复杂，且成本较高，不能满足市场快速、环保的检测需求。现有的前处理技术主要包括：基质分散萃取技术(QuEChERS等)，固相萃取技术(HLB小柱，中性氧化铝柱等)和凝胶渗透色谱法(GPC)等。其中固相萃取柱通过氢键相互作用而保留在吸附剂上，虽能有效除去油脂基质，但操作过程繁琐耗时，且重现性差；GPC方法虽具备自动化优势，但单样需耗时3小时净化完成，需要消耗大量有机溶剂，实验成本高。例如，吴春英等建立了餐厨废弃中苯并(a)芘的Oasis HLB小柱净化方法，为避免油脂洗脱，采用中等极性的乙腈作为淋洗液；同样的，王溪等采用QuEChERS/净化技术对枸杞籽油中多环芳烃类物质进行提取净化，乙腈作为提取液，对含有多个环状结构的亲脂性化合物不能保证高回收率。王磊等建立了花生油中苯并芘的凝胶色谱净化方法，经凝胶渗透色谱装置净化后联合了氧化铝填充柱除油，最大限度的降低了油脂基质干扰，且很好的保证了高回收率(95％)，但此方法有机溶剂消耗巨大，GPC净化过程繁琐耗时，随着样品检测量逐年攀升，大大限制了此方法在日常检查中的应用。如何把亲脂性化合物从油脂中有效提取出来，这始终是一个艰巨的挑战。因此，建立研究各类食用油中4种PAHs快速筛查技术对于提高监管工作效率，保障我国人民的食品安全具有非常重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种提取回收率高的食用油中4种多环芳烃化合物的快速提取净化方法及其检测应用，该检测方法操作简单快速、灵敏度和准确性高。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：

1、一种食用油中4种多环芳烃化合物的快速提取净化方法，包括以下步骤：

(1)称取待测食用油样品，依次加入提取液和脂肪酶，于37±2℃恒温震荡酶解1.5-2.5h后，加入碳酸钾和乙醇，或碳酸钠和乙醇，涡旋混匀；

(2)然后加入正己烷和水，震荡4-6min，以4000-5000r/min离心4-6min，分离得到上层有机相和下层水相；

(3)取下层水相按步骤(2)方法，重复萃取1次；合并两次萃取所得上层有机相部分，混匀，40℃旋蒸至干，用乙腈复溶，过滤膜，得到含有苯并蒽、苯并荧蒽、苯并荧蒽和苯并芘4种多环芳烃化合物的待测样品。

所述的提取液的配制方法如下：将磷酸二氢钾溶于水中配制成浓度为0.108kg/L的磷酸二氢钾溶液，用氢氧化钾调pH至8.0。