[发明专利]一种富油微藻的筛选方法

说明书

本发明提供一种富油微藻的筛选方法，属于生物技术领域，该富油微藻油脂的脂肪酸为由16和18个碳原子组成的长链脂肪酸；饱和脂肪酸为C16:0和C18:0，不饱和脂肪酸为C18:1；其中，微藻为原壳小球藻，不饱和脂肪酸的相对含量为60‑69.4％。该方法所得富油微藻遗传稳定性高，脂肪酸为由16和18个碳原子组成的长链脂肪酸，饱和脂肪酸为C16:0和C18:0，不饱和脂肪酸为C18:1且相对含量为60‑69.4％，制得的生物柴油的流动粘度和十六烷值较高、同时具有较低的冷滤点、碘值大小适宜，均达到中国、美国、欧盟、德国的生物柴油标准；增加微藻游离态多糖含量，提高自发性絮凝能力。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种富油微藻的筛选方法。

背景技术

微藻的脂肪酸能通过简单直接的工业化反应转化成生物柴油(脂肪酸甲酯)。因此，很多研究致力于提高藻株的油脂产量。富油微藻的筛选是一项重要的基础工作，选择具有高的生长速率和高的油脂含量的微藻，并进一步对其培养条件进行优化来增加油脂产率具有非常重要的意义。目前，已有很多研究者对微藻进行了油脂含量的测定，但多为富含EPA和DHA等多不饱和脂肪酸(PUFAs)的微藻。在选育微藻产油脂的第一阶段主要是在自然环境中寻求，然而自然物种的多样性使藻种的选育工作工作量巨大且不易得到显著成效，因此，基因工程、诱变育种、生物合成等方法常用于提离产量和改良产物质量(如：产物类型、易收获、提高抗病性等)。目前的研究中少于20种生产生物燃料的微藻来自菌种保藏，其中70％的藻种在同类研究中没有竞争力，为了得到油脂含量更高的藻种人工操作改变藻株的基因，从而改变生理生化过程是常用手段转基因微藻主要致力于改变生长特性和构建新的高效的表型然而目前用基因操作改良生产油脂的藻种仍然缺乏改造技术。物理诱变、化学诱变、物理化学联合诱变后用高通量筛选的方法选育优良藻株是最简单，最有效的方法之一。

现有技术如授权公告号为CN 102115776 B的中国发明专利，公开了一种微藻筛选方法及系统，该方法包括：将待筛选的微藻藻株分别置于微藻培养装置中的若干光生物反应器中培养；微藻培养装置中气体分配单元上的可控出气管和至少一个恒温水槽，为每个光生物反应器中的微藻藻株提供设定流量的光合反应气体和设定的培养温度；放置在光生物反应器侧面的灯架，为微藻藻株提供设定强度的均匀光照；性能检测设备获取每个光生物反应器中培养的微藻藻株并进行生物性能指标检测，实现筛选出生物性能指标最佳的微藻藻株。能够对不同种类的微藻藻株和相同种类的微藻藻株在不同培养条件下的生物性能指标进行准确的评价、比较和筛选，实现了微藻的高效、快速、批量化筛选。

发明内容

本发明的目的在于提供一种富油微藻的筛选方法，该方法所得富油微藻遗传稳定性高，脂肪酸为由16和18个碳原子组成的长链脂肪酸，饱和脂肪酸为C16:0和C18:0，不饱和脂肪酸为C18:1且相对含量为60-69.4％，制得的生物柴油的流动粘度和十六烷值较高、同时具有较低的冷滤点、碘值大小适宜，均达到中国、美国、欧盟、德国的生物柴油标准；增加微藻游离态多糖含量，提高自发性絮凝能力。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

提供一种富油微藻的筛选方法，富油微藻油脂的脂肪酸为由16和18个碳原子组成的长链脂肪酸；饱和脂肪酸为C16:0和C18:0，不饱和脂肪酸为C18:1；其中，微藻为原壳小球藻，不饱和脂肪酸的相对含量为60-69.4％。本发明筛选所得微藻的油脂的脂肪酸组成为：C16:0、C18:0和C18:1，且C18:1的相对含量为60-69.4％，不含有多不饱和脂肪酸，由此油脂原料制得的生物柴油的流动粘度和十六烷值较高、同时具有较低的冷滤点、碘值大小适宜不会发生固化也不会沉积，均达到中国、美国、欧盟、德国的生物柴油标准，生物柴油的品质较高。

在一些实施方式中，富油微藻的油脂含量提高40-60％。

在一些实施方式中，富油微藻的筛选方法包括诱变育种。诱变育种可以在短时间内获得大量的突变体，形成一个巨大的突变库，一定程度上可以根据对目的性状的需求进行定向育种。