[发明专利]一种簇毛麦3VL染色体分子标记检测方法及应用

说明书

本发明公开了一种簇毛麦3VL染色体分子标记检测方法及应用，所述簇毛麦3VL染色体分子标记检测用引物的核苷酸序列为：F:5’‑ATGCTGAACGCAAGGTCAAATA‑3’，R:5’‑TGCTGAAGCCCATCACGAAG‑3’；利用该方法，簇毛麦和小麦‑簇毛麦3VL附加系中能扩增出特异片段。本发明为将3VL染色体上的优良性状应用于小麦育种中提供了基础。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种簇毛麦3VL染色体分子标记检测方法及应用。

背景技术

一年生二倍体簇毛麦(2n＝14,VV)是小麦重要的近缘种属，其1V-7V染色体上都携带多种抗性基因。其中，3V染色体上具有抗小麦全蚀病及眼斑病基因。同时，普通小麦中国春(CS)-一年生二倍体簇毛麦3V附加系具有优异的小麦条锈病抗性。并已初步将该条锈抗性定位于3V染色体长臂(3VL)上。因此，迫切需要开发簇毛麦3VL的高效快速的分子标记检测方法，以使3VL染色体上的优良性状能应用于小麦育种中。

现有技术中利用RNA-seq测序结果，与小麦基因组数据库进行比对，获得检测簇毛麦3V染色体特异的标记。但这些标记未被定位于染色体臂上，因此无法满足特异检测3V染色体长臂的要求。

现有技术中已获得的3VL染色体特异的分子标记，PCR耗时大于1.5h，且由于条带较多，分辨率较低，需用聚丙烯酰胺凝胶进行电泳检测。而该电泳方法存在以下缺点：(1)耗时较长，需用2h才能拿到实验结果；(2)步骤繁琐，电泳结束后还需要进行染色-清洗-复染-清洗等处理。因此并不适合大群体高通量的小麦-3VL异源材料的筛选与鉴定。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种簇毛麦3VL染色体分子标记检测方法及应用，满足簇毛麦3VL染色体的准确鉴定与追踪。为将簇毛麦3VL染色体转移到小麦遗传背景中，并进一步在小麦遗传改良中利用簇毛麦3VL染色体的优异抗性提供了基础。

本发明采用的技术方案如下：

一种簇毛麦3VL染色体分子标记检测用引物，所述引物的核苷酸序列如下：

上游引物F:5’-ATGCTGAACGCAAGGTCAAATA-3’；

下游引物R:5’-TGCTGAAGCCCATCACGAAG-3’。

采用上述引物检测簇毛麦3VL染色体的方法，包括步骤如下：

S1.提取待测植株的DNA；

S2.以待测植株的DNA为模板，利用权利要求1所述引物3VL-71，进行PCR扩增反应；

S3.检测PCR扩增产物。

进一步地，PCR扩增反应体系如下：

样品DNA 100-150ng；

上游引物 5pmol；

下游引物 5pmol；

Taq PCR Master Mix(2×,without dye,CAT.NO:B639293)12μL；

ddH₂O 加至终体积25μL。进一步地，PCR反应程序如下：

上述的簇毛麦3VL染色体分子标记检测用引物在簇毛麦3VL染色体的鉴定与追踪中的应用。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

1、本发明的方法用于在分子标记辅助选择育种过程中，快速、有效地追踪簇毛麦的3VL染色体，有利于加快簇毛麦3VL染色体上所携带的优良性状向受体品种的转移与利用，加速育种进程，提高新品质选育的效率；