[发明专利]一种从新鲜鸡粪中提取的蛋白质及其提取方法在审
| 申请号： | 201910828241.8 | 申请日： | 2019-09-03 |
| 公开（公告）号： | CN110511263A | 公开（公告）日： | 2019-11-29 |
| 发明（设计）人： | 潘文智;崔强强;于彪;吴建新 | 申请（专利权）人： | 北京合力清源科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/14 | 分类号： | C07K1/14;C07K1/30;C07K1/36 |
| 代理公司： | 11002 北京路浩知识产权代理有限公司 | 代理人： | 陈征<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 102101 北京市延*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鸡粪 新鲜鸡粪 蛋白质 沉淀 微生物群落组成 废弃物资源化 生物有机肥 提取缓冲液 苯酚溶液 盆栽花卉 双向电泳 优化选择 沼气发电 质谱分析 研磨 粗蛋白 等电点 肥料化 规模化 黑水虻 基质化 能源化 饲料化 鱼蟹类 蚯蚓 基质 竖向 清洗 养殖业 饲料 制作 | ||
1.一种从新鲜鸡粪中提取蛋白质的方法，包括预处理新鲜鸡粪的步骤，其特征在于，向新鲜鸡粪中加入提取缓冲液进行一次处理；所述提取缓冲液包含苯酚、蔗糖、EDTA、聚乙烯吡咯烷酮、NaCl、乙醇、Tris-HCL溶液；优选所述Tris-HCL溶液的pH为8.8；再加入PMSF进行二次处理；最后加入β-巯基乙醇进行三次处理。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以提取缓冲液总体积为基准，所述提取缓冲液以0.25mol/L Tris-HCL溶液为溶剂，包含50％苯酚、0.45mol/L蔗糖、25mmol/L EDTA、2％聚乙烯吡咯烷酮、0.7mol/L NaCl、20％乙醇的溶质；
和/或，以体积比计，新鲜鸡粪：提取缓冲液＝1：5。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述预处理具体为：向新鲜鸡粪中加入提取缓冲液，研磨；再加入PMSF，研磨；最后加入β-巯基乙醇，研磨；先超声波处理后离心处理，取上面的苯酚溶液层；
优选所述超声波处理和所述离心处理均在0～5℃下进行；
更优选所述离心的转速不低于10000r/min。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，还包括从所述苯酚溶液层中沉淀蛋白质的步骤：向苯酚溶液层中依次加入NaCl溶液、溶解有醋酸铵和β-巯基乙醇的甲醇溶液，混匀、静置后离心，弃去上清液，留下层沉淀；
优选所述苯酚溶液层与NaCl溶液、溶解有醋酸铵和β-巯基乙醇的甲醇溶液的体积比为1:0.1:5；
更优选所述NaCl溶液、醋酸铵的摩尔浓度分别为5mol/L、0.1mol/L，所述β-巯基乙醇占所述甲醇溶液总体积的1％。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，还包括从所述下层沉淀中二次沉淀蛋白质的步骤：向所述下层沉淀中加入溶解有醋酸铵的甲醇溶液，混匀、静置后离心，弃去上清液，留下层沉淀；
优选所述下层沉淀与溶解有醋酸铵的甲醇溶液的体积比为1:3～1:10；
更优选所述醋酸铵的摩尔浓度为0.1mol/L。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，还包括从所述下层沉淀中三次沉淀蛋白质的步骤：向所述下层沉淀中加入丙酮，混匀后离心，弃去上清液，留下层沉淀；
优选所述下层沉淀与丙酮的体积比为1:3～1:10；
更优选所述丙酮为80％丙酮溶液。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，还包括洗涤的步骤：向所述下层沉淀中加入70％乙醇溶液，混匀后离心，弃去上清液，即得蛋白质。
8.根据权利要求4～7任一项所述的方法，其特征在于，所述离心均在0～5℃下进行；所述离心的转速不低于10000r/min。
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