[发明专利]一种提高白杨杂交育种效率的方法

说明书

本发明公开了一种提高白杨杂交育种效率的方法。本发明从366对SSR引物中筛选出扩增条带稳定、多态性好的能够用于混合白杨授粉子代群体的父本鉴定的15对SSR引物，其核苷酸序列为SEQ ID No.1‑SEQ ID No.30所示。本发明还提供了一种提高白杨杂交育种效率的方法，包括：(1)收集多个育性相似白杨雄株无性系的花粉；(2)将花粉等质量均匀混合；(3)混合花粉与育性良好的杨树雌株杂交得到杂交子代群体；(4)利用所述SSR引物鉴别出目标性状子代的父本。本发明以混合花粉进行杂交授粉，建立杂交子代群体，再利用分子标记技术，鉴别出具有目标性状的子代父本，从而有效的提高杂交育种效率，减少工作量。

技术领域

本发明涉及一种杨树育种的方法，尤其涉及一种提高白杨杂交育种效率的方法，属于白杨杂交育种领域。

背景技术

杂交是创造变异和培育林木新品种的重要手段和方法之一。随着生物技术的蓬勃发展，新的育种技术和方法不断涌现，如SNP分子标记辅助育种技术、基因组选择育种技术、基因编辑技术等。由于林木育种具有周期长，这些新技术还未能在林木育种中发挥重要作用，至今还未见相关新品种成功培育的报道。杂交仍是林木遗传改良行之有效的方法。

杨树是杨柳科杨属树种的统称，具有生长速度快、抗逆性强、适应范围广等特点，是中国北方五大造林树种之一。目前，中国林业生产中推广应用的主要杨树品种，如北林系列、南林系列以及速生杨系列等均系通过父母本两两杂交，并经过多年的田间遗传测定所选育(苏晓华,丁昌俊,马常耕.我国杨树育种的研究进展及对策.林业科学研究,2010,23(01):31-37；王瑞文,郭赟,周忠诚.杨树育种研究进展.湖北林业科技,2016,(06):33-35+80)。当亲本数量较多时，传统的父母本两两杂交存在工作量大，选择效率低等问题，亟待提供一种能够有效提高白杨杂交育种效率的方法。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种能够准确鉴别白杨雄株无性系混合授粉杂交子代的父本的SSR分子标记；

本发明的目的之二是应用所筛选出的SSR分子标记建立一种提高白杨杂交育种效率的方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

根据已知的白杨SSR引物序列，通过数据库(http://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html)查找出366对引物，进行引物的筛选。在筛选过程中，利用父母亲本DNA样本，采用TP-M13-SSR PCR技术进行PCR反应扩增，根据Schuelke(Schuelke M.An economicmethod for the fluorescent labeling of PCR fragments.Nature biotechnology,2000,18(2):233-234.)的方法，SSR共需要三种引物，包括上游引物，下游引物以及标有荧光(ROX，FAM，TAMRA，HEX等)的荧光引物。利用父母本的基因组DNA，对366对多态性好的SSR引物进行扩增，数据结果经GeneMarker V2.2.0软件进行分析，利用CERVUS 3.0软件，筛选可用于子代个体父本鉴定的SSR引物对，最终筛选出15对扩增条带稳定、多态性好的SSR引物对，其核苷酸序列分别为SEQ ID No.1-SEQ ID No.30所示。

在所筛选出的15对有效SSR引物中，除了引物SSR14不能确定其所在染色体的位置之外，其余14对SSR引物分布于9条染色上。这15对SSR引物中共检测出91个等位位点，每对引物产生的等位基因位点不等，介于3-11之间变化，平均约为6.07个等位位点。其中，引物SSR01扩增出的等位基因位点数最多，为11个；SSR03扩增出的等位基因位点数最少，仅3个。