[发明专利]一种核酸适体鉴别靶标蛋白CD63的方法及其在克服黑素瘤威罗菲尼耐药中的应用

权利要求书

1.一种识别靶标蛋白CD63的方法，其特征在于，是利用核酸适体LL4A进行识别：

所述的核酸适体LL4A的序列为：

5’-GCTGGACTCACCTCGACCAGAGCCATTGGGTTTCCTAGGAAATAGGGCCTTTACTATGAGCGAGCCTGGCG-3’。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述的核酸适体LL4A上连接荧光物质和生物素。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

①通过胰蛋白酶实验证明核酸适体LL4A结合威罗菲尼耐药黑素瘤细胞的膜蛋白；

②利用低渗缓冲液提取细胞膜蛋白；

③将生物素标记的LL4A或文库与膜蛋白孵育，再与琼脂糖珠孵育，离心得到与LL4A、文库结合的蛋白；

④利用SDS-PAGE胶分离蛋白，分析LL4A与文库的差异蛋白；

⑤切出差异蛋白，酶解，上质谱分析蛋白样品；

⑥再利用免疫荧光、siRNA干扰验证质谱结果。

4.一种核酸适体LL4A在制备识别靶标蛋白CD63试剂中的应用，其特征在于，所述的试剂中至少包含可以识别靶标蛋白CD63的权利要求1所述的核酸适体LL4A。

5.如权利要求4所述的核酸适体LL4A在制备识别靶标蛋白CD63试剂中的应用，其特征在于，所述的核酸适体LL4A上允许修饰荧光物质和/或生物素。

6.如权利要求4或5所述的核酸适体LL4A在制备识别靶标蛋白CD63试剂中的应用，其特征在于，所述的靶标蛋白CD63为黑素瘤细胞的膜蛋白。

7.如权利要求6所述的核酸适体LL4A在制备识别靶标蛋白CD63试剂中的应用，其特征在于，所述的靶标蛋白CD63为威罗菲尼耐药黑素瘤细胞的膜蛋白。