[发明专利]一株拮抗果蔬采后灰霉病原菌的细菌菌株及其应用

说明书

发明属于微生物技术领域，具体涉及一株拮抗果蔬采后灰霉病原菌的细菌菌株及其应用，本发明的拮抗菌为贝莱斯芽孢杆菌H‑1(Bacillus velezensis H1)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2019274，是从梨果实表面分离获得的，在抑制果蔬采后灰霉病方面的作用极为显著，对灰葡萄孢霉菌有很强的抑制作用，能明显抑制对灰葡萄孢霉孢子萌发和芽管的生长，并对梨采后灰霉病、冬枣采后自然腐烂和葡萄采后自然腐烂具有很好的抑制作用，为果蔬采后保鲜提供了一条环保、简单、有效的途径。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株拮抗果蔬采后灰霉病原菌的细菌菌株及其应用。

背景技术

水果产业是我国种植业中位列粮食、蔬菜之后的第三大产业，在国民经济中占有非常重要的地位。然而，果蔬在采后贮藏运输过程中，由于病原菌侵染、呼吸和衰老等原因易导致腐烂变质，造成的损失非常巨大。据估计，发达国家每年有20-25％的果蔬在釆后过程中由于病原菌的侵染导致腐烂，而在发展中国家损失则更为严重。据统计，我国每年由水果采后腐烂造成的损耗约占总产量的30％，经济损失达数百亿元人民币。随着果蔬采后生理衰老进程得到有效地控制，越来越多的研究者们开始意识到，控制果蔬的最终损失还必须从控制致病微生物所导致的采后病害入手。因此，掌握引起果蔬采后病害的病原菌种类及侵染途径，预测它们的采后致病规律，是制定控制措施的前提条件。

目前控制果蔬采后病害的主要措施是使用化学杀菌剂。尽管化学杀菌剂防治果蔬采后病害效果明显，但化学药剂的残留以及对人体健康造成的不良影响，已逐渐被人们所共识。很多杀菌剂不能再用于果蔬菜的采后贮藏，如苯来特、多菌灵、双肌盐等。因此，迫切需要寻求一些新的、无毒高效的防腐技术，以逐步取代化学杀菌剂在采后果蔬上的使用。

微生物防治技术经过二十多年的研究己从实验室向生产应用的商业化发展，许多研究都证明利用拮抗微生物来控制病害是一项具有很大潜力的新兴技术。果实采后相对稳定的贮藏环境条件以及与田间生物量相比果实采收后体积大大下降，均有利于经济、有效地实施生物控制方法。目前，分离到的生防菌主要有小型丝状真菌、细菌和酵母菌等。迄今为止，已从柑橘、苹果、桃、梨、猕猴桃、鲜枣等10多种水果中筛选出几十种拮抗微生物。

目前市场上用于采后病害防治的微生物保鲜剂商业化产品有基于拮抗细菌Pseudomonas syringae的产品(美国)(用于防治红薯和马铃薯病害)和基于拮抗酵母Metschnikowia fructicola的产品Shemer(以色列)(用于防治红薯和胡萝卜病害)。微生物保鲜领域进程也在积极推进，例如比利时的Bionext公司和法国的LeasaffreInternational公司均在研发拮抗微生物Candida oleophila产品，加拿大的NeovaTechnologies公司也在开发基于Candida saitoana的产品。此外，最近在西班牙，一个基于Candida sake的产品Gandifruit通过注册，其主要用于仁果类保鲜，目前对浆果、仁果以及核果均具有保鲜、防腐功能的微生物较少。

发明内容

本发明的目的之一是针对果蔬采后存在病原菌引起果蔬腐烂、发霉的技术问题，提供一种能够拮抗果蔬采后灰霉病原菌的细菌菌株贝莱斯芽孢杆菌H-1(Bacillusvelezensis H1)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2019274，保藏日期为2019年4月19日。

进一步的，所述果蔬采后灰霉病原菌为串珠镰孢菌、细极链格孢菌和灰葡萄孢霉菌。

本发明的目的之二是提供上述细菌菌株的发酵液。

进一步的，上述细菌菌株的发酵液的制备方法，包括以下步骤：

挑取贝莱斯芽孢杆菌H-1单菌落于LB液体培养基中28℃，200r/min，培养24h后，稀释1-10倍制得。

本发明的目的之三是提供上述细菌菌株为活性成分的灰霉病原菌生物抗菌剂。