[发明专利]一种基于铂掺杂石墨相碳化氮光催化可视化检测超氧化物歧化酶的方法

说明书

一种基于铂掺杂石墨相碳化氮光催化可视化检测超氧化物歧化酶的方法，是利用铂掺杂石墨相碳化氮光催化产生超氧自由基·O₂^‑，利用苋菜红为超氧自由基指示剂，实现对超氧化物歧化酶(SOD)的可视化检测。在SOD存在时，SOD特异性催化歧化·O₂^‑为O₂和H₂O₂，致使苋菜红被氧化的程度降低，显现出红色，因此可以实现SOD的可视化检测。该法步骤极为简单，裸眼检测的检出险为7.5nM，用分光光度法检测可达0.3nM。该方法为血液中SOD的分析提供了一种低成本、快速的新手段。

技术领域

本发明属于生物传感技术领域，具体涉及一种人血清样中光诱导铂掺杂的石墨相碳化氮传感器对超氧化物歧化酶的可视化检测法。

背景技术

SOD是一种含有不同金属离子的氧化还原酶，广泛存在于动植物和微生物中。最近的研究表明SOD在维持机体稳态与消除体内的·O₂^-中起着重要作用。血清中SOD水平与许多疾病间接相关，如脑血管疾病、肺部疾病、自身免疫性疾病等。因此，对于血液样品中SOD的分析检测是非常重要的。

传统的SOD的检测方法主要包括免疫分析法(Yang X,Analyst,2013,138:3246-3252.)，荧光分光光度法(Wei W,Spectrochimica Acta,2008,70:389-393.)，和电化学方法(Lisdat F, Fresenius'Journal of Analytical Chemistry,1999,365:494-498.)等。但是，由于它们需要大规模的精密仪器，分析成本高或需要复杂的操作步骤，目前，这些方法尚不能用于对SOD经济而快速的测定。

相比之下，分光光度法(Martin J P,Methods in Enzymology,1990,186:220-227.)成本更低且更容易。其常规方法是基于超氧化物还原产物(如硝基蓝四唑、细胞色素c等)或对邻苯三酚，羟基多巴胺等的自氧化的光度测量。但是，这些方法通常具有基板不稳定和干扰大的缺点，导致其实际应用价值较小。因此，开发一种简单，快速，灵敏的SOD检测方法是非常必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简单快速、成本低、高选择性的检测人类血清中SOD含量的方法，其原理在于光激发下的CN-Pt能催化溶解氧生成具有强氧化性的·O₂^-，而偶氮染料苋菜红降解极中的偶氮键易被·O₂^-氧化成无色的溶液，可以作为·O₂^-的指示剂；当SOD存在时，可特异性催化·O₂^-，从而抑制了苋菜红的氧化，呈现出红色，实现可视化检测。本发明的技术方案如下：

(1)在多孔板中依次加入CN-Pt纳米材料，苋菜红溶液，SOD标准溶液或人血清样品，加入磷酸缓冲溶液使溶液pH在2.0-4.0之间；

(2)将上述溶液混合均匀后，置于紫灯下光照20-40min；

(3)将光照后的溶液，通过对比颜色，实现对SOD的半定量分析；继续将混合液离心，取上清液，测定吸光度值，通过吸光度进行SOD的准确定量分析。

发明效果

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

(1)灵敏度高，可实现对溶液中低至7.5nM SOD的可视化检测；

(2)选择性好，本方法干扰较小，对SOD活性的测定具有专一性；

(3)成本低，无需再使用其他生物酶及双氧水；

(4)操作简便。

具体实施方式