[发明专利]精制多价抗蛇毒冻干血清及其制备方法

说明书

本发明涉及生物医药领域，具体公开了一种精制多价抗蛇毒冻干血清及其制备方法，本发明的多价抗蛇毒血清为抗溶血性蛇毒、神经性蛇毒、混合型蛇毒血清的一种或两种以上的混合物，抗蛇毒血清F(ab’)₂纯度在90％以上；抗蛇毒血清F(ab’)₂的制备步骤包括：利用新鲜蛇毒制备免疫抗原、用蛇毒对动物进行免疫、免疫血浆效价合格时采血分离血浆并从血浆中提取IgG、提取和纯化F(ab’)₂。本发明的精制多价抗蛇毒冻干血清提取工艺采结合盐析、柱层析和凝胶过滤等方法，得到的抗体纯度高，溶解快，异物蛋白低。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种精制多价抗蛇毒冻干血清及其制备方法。

背景技术

毒蛇咬伤是一种常见急症，其致死率致残率较高。蛇毒毒素吸收的速度和总量是决定救治成功的关键因素，在咬伤部位切开排毒必须在很短时间内实施，且这种单个切口和利用重力自然引流的方法排出毒素含量非常低，毒素的继续吸收会加重局部和全身毒性反应。如果不能在毒蛇咬伤早期尽快采取有效方法排除毒液、控制毒素吸收，就容易引起全身和局部并发症，导致对机体的更大伤害。

目前抗蛇毒血清的使用被认为是毒蛇咬伤的特效治疗，在临床应用中这种治疗虽然有效但有较多局限性，许多地区存在用药短缺的情况，而且蛇毒血清使用容易引起不良反应。世界上每年有500万人被毒蛇咬伤，有5万人因为没有及时注射蛇毒血清死于非命。

我国的蛇类有200多种，其中毒蛇有50多种，包括16种剧毒海蛇和近40种陆生剧毒和轻毒蛇。在我国分布广、危害大的有11种剧毒蛇，分别是：莽山烙铁头、五步蛇、蝮蛇、烙铁头、竹叶青、蝰蛇、银环蛇、金环蛇、眼镜蛇、眼镜王蛇、海蛇。近年来，由于生态环境的改善，加之炎热的气候持续时间延长，促使蛇的活动增加，原来罕见的郊区地带也较频繁地出现，且毒蛇养殖技术日趋成熟，毒蛇养殖规模不断扩大，这些因素导致了近年来被蛇咬伤的患者增加，从我国大多数医院收治的蛇伤病人来看，我国每年的蛇伤患者约为120万人左右。但我国目前批准抗蛇毒血清少，且为水针制剂，不易保管运输，无法冰冻保存，有效期短，副作用大。现有的抗蛇毒血清纯度低60％。

因此，有必要提供一种便于保存且副作用小的抗蛇毒血清。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的一个目的是提供一种新型精制多价抗蛇毒血清的冻干制备方法，该方法具有纯度高、副作用小、溶解时间短、便于保存和使用等优势。

本发明的又一目的是提供一种制备上述抗蛇毒血清的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案：

一种精制多价抗蛇毒冻干血清，抗蛇毒血清F(ab’)₂纯度在90％以上。

优选地，所述抗蛇毒血清F(ab’)₂为抗溶血性蛇毒、神经性蛇毒、混合型蛇毒血清的一种或两种以上的混合物。

一种精制多价抗蛇毒冻干血清的制备方法，包括步骤：

(1)制备免疫抗原：提取毒蛇新鲜毒液，低温离心，取上清液真空冷冻干燥；混合同类型的干燥蛇毒作为免疫抗原，测定毒力；将所述免疫抗原用0.2-0.25μm滤膜过滤除菌，并进行脱毒处理；

(2)免疫：试血，用蛇毒对动物进行免疫；

(3)采血：免疫血浆效价达到要求时进行采血，并离心分离血浆；

(4)精制血清：从动物血浆提取IgG、F(ab’)₂提取和F(ab’)₂纯化，收集抗体，脱盐、冻干，即得所述精制多价抗蛇毒冻干血清。