[发明专利]一种无血清制备牛支原体抗原的方法在审
| 申请号： | 201910832526.9 | 申请日： | 2019-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN110551653A | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 陈胜利;储岳峰;郝华芳;颜新敏;刘永生 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/35 |
| 代理公司： | 11279 北京中誉威圣知识产权代理有限公司 | 代理人： | 贾慧娜 |
| 地址： | 730046 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 无血清 支原体 接种 支原体抗原 死亡鸡胚 接种液 抗原 鸡胚 动物血清 种蛋孵化 孵化箱 尿囊液 滴度 活菌 日龄 无菌 制备 健康 新鲜 观察 生产 | ||
1.一种无血清制备牛支原体抗原的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将新鲜的SPF种蛋孵化，培养7-8天，挑选出发育良好、血管清晰、活力旺盛的健康鸡胚；
(2)准备牛支原体接种液；
(3)将牛支原体接种液接种选取的健康7-8日龄SPF鸡胚，接种后，置于孵化箱中继续培养，观察鸡胚状态，收集接种死亡鸡胚，2-8℃放置12-24h；
(4)无菌收集死亡鸡胚尿囊液，得到牛支原体无血清抗原。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)和步骤(2)的顺序互调。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述准备牛支原体接种液的具体方法为：复苏并传代牛支原体菌株，37℃恒温培养箱培养18-36h，待培养基的颜色变黄或pH值由7.4降至6.8-7.0时，离心，生理盐水重悬菌体，得到牛支原体接种液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述接种为卵黄囊接种，接种量为每枚鸡胚接种0.2ml。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述孵化箱温度37.0～37.5℃，湿度为50％。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)后，还包括将收集的鸡胚尿囊液接种7-8日龄健康SPF鸡胚，用相同的方法接种传代3-5次，无菌收集鸡胚尿囊液的步骤。
7.根据权利要求1-7任一项所述的一种无血清制备牛支原体抗原的方法在牛支原体培养中的应用。
8.根据权利要求1-7任一项所述的一种无血清制备牛支原体抗原的方法在牛支原体疫苗抗原制备中的应用。
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