[发明专利]一种红细胞渗透脆性测定方法及其试剂盒

说明书

本发明提供一种红细胞渗透脆性测定方法及其试剂盒，其中测定方法包括：S1、在两个比色杯中分别加入等量的不同浓度的低渗透压盐溶液，其中一管是不完全溶血管，其加入的低渗透压盐溶液不能使全血完全溶血，另一管是完全溶血管，其加入的低渗透压盐溶液可以使全血完全溶血；S2、分别往两个比色杯中加入等量全血，混匀后，立即检测不完全溶血管中混合液的散射光值A0、完全溶血管中混合液的散射光值B0；S3、在溶血结束后的某一特定时间，测定不完全溶血管中混合液的的散射光值A1、完全溶血管中混合液的B1；S4、根据公式：溶血百分率%=（A0‑A1）/（B0‑B1）×100%计算不完全溶血管的溶血百分率。该测定方法的检测结果更精确，且能够实现结果标准化和一致性。

技术领域

本发明涉及红细胞渗透脆性测定技术领域，具体涉及一种红细胞渗透脆性测定方法及其试剂盒。

背景技术

人体内成熟红细胞的正常寿命约为120天，存活期间在循环体系中约穿行500公里，多次挤过比自身直径小得多的血管和孔隙，因此红细胞必须具有良好的韧性和变形能力。红细胞主要靠红细胞膜来维持变形性和稳定性，若膜上某种蛋白发生变化，可引发溶血，如遗传性球形红细胞增多症。

红细胞渗透脆性是检验红细胞膜缺陷的一个临床常用指标，红细胞渗透脆性试验是测定红细胞在不同浓度的低渗盐水溶液内，所能承受的吸水膨胀能力。正常的红细胞为双凹圆盘形，若将红细胞置于低渗溶液中，因细胞内外存在渗透压差，水分子进入红细胞，使其发生肿胀，乃至红细胞破裂而发生溶血。红细胞在低渗透压盐溶液中出现溶血的特征即为红细胞渗透脆性，其主要取决于红细胞的表面积与体积之比。表面积大而体积小者对低渗盐水容易的抵抗力较大(脆性较小)，反之则抵抗力较小(脆性增加)。(尚红、王毓三、申子瑜，全国临床检验操作规程(第4版)[M].北京:人民卫生出版社，2015.66)。

渗透脆性增加见于遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形红细胞增多症和部分遗传性口形红细胞增多症，亦可见于自身免疫性溶血性贫血。渗透脆性降低见于各型珠蛋白生成障碍性贫血，HbC、HbD、HbE病，缺铁性贫血，地中海贫血、脾切除术后及其他一些红细胞膜异常的疾病如肝脏疾病等。(尚红、王毓三、申子瑜，全国临床检验操作规程(第4版)[M].北京:人民卫生出版社，2015.66)

目前临床上检测红细胞渗透脆性的方法主要有以下三种：

一、传统手工法(尚红、王毓三、申子瑜，全国临床检验操作规程(第4版)[M].北京:人民卫生出版社，2015.66)：

检测步骤如下：

(1)取清洁干燥小试管14支，各管按表1加蒸馏水和10g/L氯化钠溶液。

(2)用干燥灭菌注射器取被检者静脉血1mL，针头斜面向上，平执注射器，通过针头在每管加入1滴全血，轻轻摇匀；以同样方法取正常人血加于正常对照组试管。

(3)将各管静置室温中2小时，从高浓度开始观察全部14管溶血现象。

表1氯化钠溶液稀释表

二、改良Sanford法(简易半定量法)(王维维、袁向亮、费奇力、沈立松，流式细胞术快速测定红细胞渗透脆性的应用[J].检验医学，2016；31(10)，911-915)：

检测步骤如下：

取13支试管编号，用9g/LNaCl和无菌水配制成下述浓度的NaCl溶液：1.0g/L、2.0g/L、3.0g/L、3.5g/L、4.0g/L、4.5g/L、5.0g/L、5.5g/L、6.0g/L、6.5g/L、7.0g/L、7.5g/L、8.5g/L；

每管加肝素抗凝全血50μl，轻轻颠倒混匀，室温(20℃)放置30min；

将各管混匀1次，3000×g离心3min，取上清200μl至96孔平底板，测定各管上清液吸光度A值；