[发明专利]基因组DNA的提取方法、测序方法及试剂盒有效
申请号: | 201910836168.9 | 申请日: | 2019-09-05 |
公开(公告)号: | CN110511977B | 公开(公告)日: | 2023-07-21 |
发明(设计)人: | 刘晨;黄金;周荣芳;周晏秋;吴传文;田志坚 | 申请(专利权)人: | 武汉华大基因技术服务有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6806 | 分类号: | C12Q1/6806;C12Q1/6869 |
代理公司: | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人: | 张立 |
地址: | 430073 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 基因组 dna 提取 方法 试剂盒 | ||
1.一种基因组DNA的提取方法,其特征在于,包括:
(1)将待测样本和第一溶液混合,进行冷冻研磨,获得研磨样本,所述第一溶液包括异硫氰酸胍、巯基乙醇、Tris-HCl和EDTA,所述第一溶液中所述异硫氰酸胍的使用浓度为4M;
(2)将所述研磨样本和第二溶液混合,提取、分离获得含有DNA的产物,所述第二溶液含有CTAB、磷酸盐缓冲液、Tris-HCl、EDTA、氯化钠和SDS;
(3)利用蛋白酶和RNase A酶对所述含有DNA的产物进行消化处理,以便去除所述含有DNA的产物中的蛋白质和RNA;
(4)对步骤(3)所获得的产物进行纯化处理,以便获得所述基因组DNA;所述纯化处理包括:采用含有磁珠的混合液对步骤(3)所获得的产物进行纯化处理,所述含有磁珠的混合液包括磁珠和磁珠缓冲液,所述磁珠缓冲液包括PEG8000,氯化钠,Tris-HCl,EDTA和吐温20,所述磁珠缓冲液中PEG8000的质量浓度为15%;
所述基因组DNA用于三代测序,所述待测样本为土壤。
2.一种对测序样本进行测序的方法,其特征在于,包括:
基于权利要求1所述的方法提取所述待测样本中的基因组DNA,
基于所述基因组DNA,构建测序文库,利用第三代测序技术进行测序。
3.一种利用试剂盒对土壤样本进行基因组DNA提取的方法,其特征在于,所述试剂盒包括:
第一溶液,所述第一溶液包括异硫氰酸胍、巯基乙醇、Tris-HCl和EDTA,所述异硫氰酸胍的使用浓度为4M;
第二溶液,所述第二溶液含有CTAB、磷酸盐缓冲液、氯化钠、Tris-HCl、EDTA和SDS;
磁珠和磁珠缓冲液,所述磁珠缓冲液包括PEG8000、氯化钠,Tris-HCl、EDTA和吐温20,所述磁珠缓冲液中PEG8000的质量浓度为15%;
蛋白酶和RNase A酶。
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