[发明专利]一种黄果野鸦椿的组织培养方法

权利要求书

1.一种黄果野鸦椿的组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：

⑴截取一年生黄果野鸦椿无分枝枝条，冲洗后室内水培；

⑵选取靠近枝条顶端的叶片清洗，冲洗，沥干水分，置入超净工作台；切取复叶用75%乙醇浸泡后无菌水冲洗，然后汞溶液消毒，再无菌水冲洗，沥干水分，得黄果野鸦椿复叶小段，备用；

⑶将步骤⑵获得的黄果野鸦椿复叶小段接种于MS无激素培养基中进行无菌诱导培养，培养5～7 d，得无菌黄果野鸦椿复叶小段；所述MS无激素培养基为：1/2 MS + 20～25g/L蔗糖 + 7～8g/L琼脂，pH5.8～6.2；

⑷将步骤⑶获得的无菌黄果野鸦椿复叶小段从培养基中取出，在超净工作台上，沿叶轴方向留0.5 cm，切除其余小叶，接种于愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导，经过120～150 d培养，分化一定数量的黄果野鸦椿愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基为：1/2MS+20～25g/L蔗糖+7～8g/L琼脂，pH 5.8～6.2；

⑸将步骤⑷获得的黄果野鸦椿愈伤组织，转接至初代诱导培养基中成苗诱导，经30 d培养出苗，得黄果野鸦椿幼苗；所述初代诱导培养基为：4/5 MS + 6-BA 0.5～1.0 mg/L +NAA 0.05～0.1 mg/L + 20～25 g/L蔗糖 + 7～8 g/L琼脂，pH 5.8～6.2；

⑹将步骤⑸获得的黄果野鸦椿幼苗，转接至增殖培养基中，进行丛生芽诱导，培养周期30 d，得黄果野鸦椿幼苗；所述增殖培养基为：MS + 6-BA 1.0～1.5 mg/L + NAA 0.1～0.2mg/L + 25～30 g/L蔗糖 + 8～9 g/L琼脂，pH5.8～6.2；

⑺从步骤⑹获得的黄果野鸦椿幼苗中，选取株高大于1 cm、着生2～4片复叶、生长健壮的植株，转接至生根培养基进行生根诱导，培养周期30～60 d；所述生根培养基为：1/2 WPM+ NAA 1.0～2.0 mg/L + 2,4-D 1.0～2.0 mg/L + 20～25 g/L蔗糖 + 8～9 g/L琼脂 + 2～3 g/L活性炭，pH5.8～6.2；

⑻从步骤⑺生根诱导后的黄果野鸦椿幼苗中，选取株高2～3cm、着生6片复叶、根数为3～5条，根长大于2cm，生长健壮的幼苗，进行带瓶、揭盖、遮阴、保湿的室外驯化培养，培养周期为5～7d。

2.如权利要求1所述一种黄果野鸦椿的组织培养方法，其特征在于在步骤⑴中，所述截取一年生黄果野鸦椿无分枝枝条，冲洗后室内水培的具体步骤为：截取一年生黄果野鸦椿无分枝枝条，自来水下冲洗3～5min，室内水培5～7d，每天更换清水一次，选取靠近枝条顶端的叶片。

3.如权利要求1所述一种黄果野鸦椿的组织培养方法，其特征在于在步骤⑵中，所述选取靠近枝条顶端的叶片清洗，冲洗，是选取靠近枝条顶端的带叶柄叶片加入洗洁精清洗，自来水下冲洗10～15min。

4.如权利要求1所述一种黄果野鸦椿的组织培养方法，其特征在于在步骤⑵中，所述切取复叶用75%乙醇浸泡后无菌水冲洗的具体方法为：切取复叶，每段留叶轴和2～3个完整小叶，按生长方向，上部短截，下部长截，75%乙醇浸泡30s，无菌水冲洗；所述汞溶液消毒用0.1%升汞溶液消毒4～8min。

5.如权利要求1所述一种黄果野鸦椿的组织培养方法，其特征在于在步骤⑸中，所述黄果野鸦椿愈伤组织为质地紧实、微绿色组织块。